下方实验步骤:以SBI 品牌EXOF500A-1 为例
由于外泌体粒径较小,流式细胞术检测外泌体与检测细胞有所不同。您可以利用 SBI 独家 ExoFlow-ONE Gemstone 染料,充分利用流式方法分析细胞外囊泡 (EV)。通过使用这些专有的高量子效率染料对EV内部成分进行特异性标记,获得接近单囊泡的分辨率,从而进行更强大的流式细胞仪和FACS研究。
下方实验步骤:以SBI 品牌EXOF500A-1 为例
建议:使用前把混合参考beads ,翻转滴瓶几次;并使用500µL 1xPBS预过滤使用0.02µm过滤器的润湿。
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
重悬
在使用0.02µm滤波器预过滤的500μL PBS中重悬200-500μg蛋白量的EV。
振荡孵育
将1μL的标记染料加入到外泌体制剂中,在37℃下振荡孵育20分钟。
分析
标记的外泌体现在已经准备好用于流式细胞仪分析。(需要专门的流式细胞术成像仪器:例如Amnamis®Apogee微标记II)
渗透
ExoFlow-ONE染料具有膜渗透性,在外泌体内化后被荧光激活;缓冲液中残留的游离染料没有显示出任何可检测的背景。如果需要去除游离染料,建议采用以下可选程序(试剂盒包括去除试剂)。
可选的染料去除步骤
1.在溶液中加入167μL ExoQuick-TC,4℃孵育2小时。
2.以10000rpm的转速以10分钟旋转10分钟,使EV成球。
3.小心地从试管的拐角处抽出上清液。
4.在使用0.02µm过滤器的500μL PBS中进行预过滤,并进行流式细胞仪分析。