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4.2.2 外泌体鉴定方法-纳米流式细胞术

| 4.3 外泌体鉴定-表面标志物

下方实验步骤:以SBI 品牌EXOF500A-1 为例

由于外泌体粒径较小,流式细胞术检测外泌体与检测细胞有所不同。您可以利用 SBI 独家 ExoFlow-ONE Gemstone 染料,充分利用流式方法分析细胞外囊泡 (EV)。通过使用这些专有的高量子效率染料对EV内部成分进行特异性标记,获得接近单囊泡的分辨率,从而进行更强大的流式细胞仪和FACS研究。
下方实验步骤:以SBI 品牌EXOF500A-1 为例
建议:使用前把混合参考beads ,翻转滴瓶几次;并使用500µL 1xPBS预过滤使用0.02µm过滤器的润湿。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 1

    重悬

    使用0.02µm滤波器预过滤的500μL PBS中重悬200-500μg蛋白量的EV

  • 2

    振荡孵育

    1μL的标记染料加入到外泌体制剂中,在37℃下振荡孵育20分钟。

  • 3

    分析

    标记的外泌体现在已经准备好用于流式细胞仪分析。(需要专门的流式细胞术成像仪器:例如Amnamis®Apogee微标记II)

  • 4

    渗透

    ExoFlow-ONE染料具有膜渗透性,在外泌体内化后被荧光激活;缓冲液中残留的游离染料没有显示出任何可检测的背景。如果需要去除游离染料,建议采用以下可选程序(试剂盒包括去除试剂)。

  • 5

    可选的染料去除步骤

    1.在溶液中加入167μL ExoQuick-TC,4℃孵育2小时。 
    2.以10000rpm的转速以10分钟旋转10分钟,使EV成球。 
    3.小心地从试管的拐角处抽出上清液。 
    4.在使用0.02µm过滤器的500μL PBS中进行预过滤,并进行流式细胞仪分析。

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