实验流程
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重悬
将外泌体沉淀放在200µL RIPA缓冲液中（加入适当的蛋白酶抑制剂）中重悬于外泌体，涡旋15秒
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放置
在室温下放置5分钟
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测定
采用standard Bradford protein assay测定产量。建议每孔运行~20µg蛋白。
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加热
加入Laemmli缓冲液2（含巯基乙醇），95⁰C加热5分钟
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冷冻
在冰上冷冻5分钟，然后上样到凝胶中
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电泳和WB转膜
SDS-PAGE电泳和WB转膜
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封闭
用5%的奶粉加入Tris缓冲盐水+ 0.05% Tween（TBS-T）封闭1小时
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孵育
用外泌体特异性一抗（即EXOAB）在1：1000稀释（5%奶粉TBS-T）中孵育过夜
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清洗
用TBS-T清洗3X
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稀释
二抗（山羊-Rabbit-HRP）稀释1：20000（5%奶粉TBS-T)室温孵育1小时
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清洗
用TBS-T清洗3X
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孵育
用化学发光底物孵育blot，并在胶片或其他成像设备上进行可视化