下方实验步骤：以ExoMS™ Total Protein Capture Kit为例，货号EXOMS120A-8
原理概述
ExoMS系列蛋白捕获技术基于亲和纯化技术（ExoMS 总蛋白捕获试剂盒）or两步法生物素化和磁珠捕获过程（ExoMS 表面蛋白捕获试剂盒），能有效地将表面蛋白和膜蛋白与内部 EV 蛋白隔离开来。
ExoMS系列 蛋白捕获试剂盒中使用的专有亲和性树脂是这些试剂盒实现灵敏生物标记检测的关键。并且能减少外泌体纯化过程的其他蛋白质杂质（如albumin和 IgG），降低它们在质谱分析中的强信号，从而提高对更相关但丰度较低的蛋白质的检测
图 5 实验流程
△点击放大图片
净化步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 7
- 8
- 9
- 10
- 11
- 12
- 13
- 14
- 15
-
分离
按选择的方法分离外泌体
-
添加
向纯化后的外泌体中添加等体积的Buffer A(v/v）。例如：如果您有200µl的外泌体，则添加200µL的Buffer A
!注意：不要超过总体积的400µL -
取出
取出Purification column, 打开盖子，折断bottom closure。将列放入一个collection tube中
！注意：保留 bottom closure 为了后续步骤8-12 -
离心
1,000 x g离心30秒，除去storage buffer
-
去除
去除液体，然后将柱放回ollection tube中
-
清洗
清洗column，取下盖子，加入500µl Buffer B，1000xg离心30秒。去掉液体
！注意：保存盖子等待步骤9-12 -
重复
再次重复步骤6
-
上样
用bottom closure插入柱的底部。加入100µl的buffer B，准备好上样
-
固定
添加将步骤2 处理后的外泌体，将盖子牢固地，放在柱上
-
搅拌
在室温（RT）条件下下，在摇床上搅拌不超过5分钟。
！注意：bottom closure去除后，样品将开始洗脱 -
转移
将纯化柱转移到2 mL管中，松开盖子并拆下bottom closure
-
离心
1000xg离心30秒
-
加入
在纯化的外泌体蛋白中加入10µL的1M Tris pH 8.0，确保pH为8-9
-
丢弃
丢弃纯化柱
-
热门产品
ExoMS™ Total Protein Capture Kit
特点：
独一无二--市场上唯一能特异性捕获外泌体表面蛋白和膜蛋白的试剂盒
灵敏--可去除外泌体预处理物中的许多常见杂质，如albumin和 IgG，从而提高 LC/MS 的生物标记物检测能力
兼容--适用于使用多种方法分离的外泌体，包括 ExoQuick®、ExoQuick® PLUS、超速离心法和其他供应商销售的大多数基于柱的试剂盒
快速--从分离样品到 LC/MS 分析只需不到 5 个小时
灵活--可选择本试剂盒从已分离的外泌体中制备总蛋白，或选择ExoMS Surface Protein Capture Kit (Serum/Plasma)从血清或血浆中分离的外泌体中分离表面蛋白，或选择 ExoMS Surface Protein Capture Kit (Tissue Culture)从组织培养基或血清或血浆以外的任何生物流体中分离外泌体表面蛋白请向上滑动↑，查看“推荐产品”“推荐产品”，请查看右侧 →