7.3 外泌体定量-EXOCET 法

外泌体纯化

每次反应添加大约20-100µg的外泌体蛋白。建议先试用一小部分沉淀的外泌体进行蛋白质分析来确定使用多少，可使用BCA分析or NanoDrop估计样本中的蛋白质
蛋白质测定后，计算20-100µg蛋白所需的外泌体体积。加入裂解缓冲液，总体积为100µl。
在37°C下孵育5分钟，释放出外泌体蛋白。漩涡持续15秒，500 x g离心5分钟，清除碎片。将上清液转移到新离心管中（冰上）

制备标准曲线

准备好新鲜的 EXOCET 反应缓冲液，将缓冲液 A 与缓冲液 B 混合。每个反应需要使用 50 µL 缓冲液 A 加 0.5 µL 缓冲液 B，充分混合后在 1 小时内使用。

首先加入 50 µL 反应缓冲液（A+B，新鲜配制） 
然后加入 50 µL 标准样品或外泌体样品 
总计：100 µL 反应体积

让平板在室温下孵育 10-20 分钟

立即使用Spectrophotometric plate reader在 405 nm进行读板（无需反应停止缓冲液）。

通过计算标准曲线并将样品读数绘制在标准曲线上，对结果进行定量。
样本数据显示了一组示例数据。根据孵育时间的不同，每种标准物质的吸光度可能会有所不同。标准曲线给出的是样本中外泌体的数量（而非浓度）。计算样本中的浓度：用样本中的外泌体数量除以检测中所用外泌体样本的体积