实验原理简述：
一种基于荧光的、高灵敏度的酶分析方法，可测量外泌体内的酯酶活性。该方法对所有被测哺乳动物物种（人类、小鼠、大鼠）的外泌体都具有活性，并与使用ExoQuick、ExoQuick-TC、超离心、免疫亲和纯化和层析方法分离的外泌体兼容。该试剂盒中包含了一条通过NanoSight 分析校准为分离的外泌体的标准曲线。
实验步骤
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纯化外泌体
纯化外泌体
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试剂准备
试剂盒内容物如下
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a) 在开始实验前，将bufferA和B在黑暗中解冻，并让它们平衡到室温
b) 准备Buffer A工作液：每添加1 mL的Buffer A，加入10µL的Detection reagent。搅拌均匀，防止光照。可以在-80°C下保存数周。
c) 准备Buffer B工作液：每1 mL Buffer B，加入4µL 0.5M氯化乙酰胆碱溶液。 -
样品制备
a) 用PBS中重悬浮外泌体颗粒
b) 通过Bradford assay或Nanodrop法定量总外泌体蛋白含量。将600ng-1µg蛋白量的外泌体溶液转移至一个干净的1.5 mL离心管中，（最大体积为60µL）。重复
c) 在步骤2的60µL外泌体悬液中加入60µL裂解缓冲液，达到120µL。
d) 在冰上孵育30分钟，以释放出外泌体蛋白。 -
标准液建立
a) 首先在微离心管中用 1X Reaction Buffer冲液按 1:64 稀释 FluoroCet 标准品（例如，将 2µL 标准品加入 126µL 1X 反应缓冲液中）。涡旋混合均匀。将此稀释液作为第一标准
标准曲线。
b) 在微离心管中用 1X 反应缓冲液对第一标准液进行序列稀释。每次稀释后 混合均匀。
c) 用于绘制 FluoroCet 标准曲线的建议稀释倍数如下图所示。要重复运行标准品
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检测
a) 在96孔板中进行如下配置
50µL标准液 or 外泌体裂解产品+50µL Buffer A 工作液+50µL Buffer B 工作液（150µL 反应体系）
b) 轻轻敲击孔板侧面以均匀混合试剂
c) 在室温下避光孵育 20 分钟。
d) 使用酶标仪读板，激发光谱： 530-570nm 和发射光谱： 590- 600 纳米。读数前预混 30 秒。根据仪器读数对结果进行定量。
e) 使用标准数据分析软件（如 Excel）分析数据。对标准曲线进行线性回归。从标准值和实验值中减去空白值。标准曲线确定样本中外泌体的数量（而非浓度）。
要计算实验样品中的外泌体浓度，可将该孔中的外泌体数量除以外泌体的体积。