Exo-Fect™系列是外泌体工程化专用转染试剂,可用于装载或“转染”含有siRNA、microRNA、mRNA、质粒DNA以及小分子。
实验流程
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实验步骤
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纯化外泌体
纯化外泌体
转染
在一个干净的1.5 mL试管中,结合以下物: 10 ul体外缺陷溶液+20 ul核酸(20 pmolsi/miRNA,1 ug mRNA或5 ug质粒DNA)70 ul无菌1x PBS 50 ul纯化的外泌体在1x PBS悬液中150 ul总转染反应
通过翻转/反转三次,充分混合,不要产生漩涡
将外泌体转染溶液在37°C的摇床上孵育10分钟,然后立即将试管放在冰上。为停止反应,将试剂盒中提供的ExoQuick-TC试剂30 μL加入到转染的外泌体样品悬液中,通过反转混合6次。不要产生漩涡。
将转染后的外泌体样本放在冰上(或4°C)30分钟
13000-14000转/分的速度离心3分钟
取出上清液,在300 μL 1x PBS中重悬转染后的外泌体颗粒
转染后的外泌体准备被添加到靶细胞或在体内使用添加 Exo-Fect exosomes 到细胞
使用无外泌体的血清和培养基中培养细胞,以六孔板为例,每孔约1x10^5个细胞,每孔添加至少150 μL Exo-Fect试剂。
孵育细胞2至24小时,使用荧光显微镜使用进行观察热门产品
Exo-Fect Exosome Transfection Kit
特点:
使用方便,装载程序快速简单
可将多种生物大分子直接引入已纯化的外泌体:
RNA,包括 siRNA、miRNA 和 mRNA
DNA,包括质粒
代谢物和其他小分子
实现非病毒转导和稳定细胞系的创建
为难以转染的细胞提供另一种基因传递方法图 16 Exo-Fect 甚至可用于将小分子转染到外泌体中
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