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8.3.2 外泌体工程化-外源性装载-外泌体转染

| 8.3.3 外泌体工程化-外源性装载-靶向肽

Exo-Fect™系列是外泌体工程化专用转染试剂,可用于装载或“转染”含有siRNA、microRNA、mRNA、质粒DNA以及小分子。


实验流程

△点击放大图片

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    纯化外泌体

    纯化外泌体

  • 2

    转染

    在一个干净的1.5 mL试管中,结合以下物: 10 ul体外缺陷溶液+20 ul核酸(20 pmolsi/miRNA,1 ug mRNA或5 ug质粒DNA)70 ul无菌1x PBS 50 ul纯化的外泌体在1x PBS悬液中150 ul总转染反应
    通过翻转/反转三次,充分混合,不要产生漩涡
    将外泌体转染溶液在37°C的摇床上孵育10分钟,然后立即将试管放在冰上。为停止反应,将试剂盒中提供的ExoQuick-TC试剂30 μL加入到转染的外泌体样品悬液中,通过反转混合6次。不要产生漩涡。 
    将转染后的外泌体样本放在冰上(或4°C)30分钟
    13000-14000转/分的速度离心3分钟
    取出上清液,在300 μL 1x PBS中重悬转染后的外泌体颗粒
    转染后的外泌体准备被添加到靶细胞或在体内使用

  • 3

    添加 Exo-Fect exosomes 到细胞

    使用无外泌体的血清和培养基中培养细胞,以六孔板为例,每孔约1x10^5个细胞,每孔添加至少150 μL Exo-Fect试剂。
    孵育细胞2至24小时,使用荧光显微镜使用进行观察

  • 4

    热门产品

    Exo-Fect Exosome Transfection Kit
    特点:
    使用方便,装载程序快速简单
    可将多种生物大分子直接引入已纯化的外泌体:
    RNA,包括 siRNA、miRNA 和 mRNA
    DNA,包括质粒
    代谢物和其他小分子
    实现非病毒转导和稳定细胞系的创建
    为难以转染的细胞提供另一种基因传递方法

     

    图 16 Exo-Fect 甚至可用于将小分子转染到外泌体中
    △点击放大图片

     

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