1.1.2  瞬时沉默-CRISPRi synthetic sgRNA

确保第二天转染时细胞融合度在70%-90%

a.  用10mM Tris-HCI(pH7.4)稀释sgRNA至2.5μM工作浓度
b.  用无血清培养基稀释CRISPRmod mRNA至工作浓度100ng/μL
c.  管1中加入1μL的2.5μM sgRNA和2μL的100ng/μL CRISPRmod mRNA，加入7μL无血清培养基至总体积10μL
d.  管2中加入转染试剂(这里以DharmaFECT Duo为例)0.1-0.8μL。用无血清培养基补足至总体积10μL
e.  分别混匀管1和管2，室温静置5min
f.   将管1中液体加至管2中，轻轻混匀，室温静置20min
g.  加入80μL完全培养基补足至总体积100μL
h.  弃除细胞板中的培养基，将配置好的100μL转染复合物添加至板孔中

37℃，5%CO₂中培养48-72h后进行表型分析或基因表达分析

推荐使用RT-qPCR的方式进行基因抑制检测，且需搭配足够的技术重复和相应的对照