2.1.1  体内专用转染试剂：in vivo-jetPEI

 

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in vivo-jetPEI与核酸复合物的配制必须是在洁净环境中，并搭配使用转染试剂盒中的10%葡萄糖溶液，最终注射时葡萄糖浓度必须是5%。推荐提前准备好注射预混液，确保复合物混合均匀，最小预混体积是50μL

1）提前确定实验方案和参数：
a.  根据不同注射用量推荐表，确定每只动物最终复合物的注射体积
b.  根据不同注射用量推荐表，确定核酸用量
Note：最终注射体积中核酸的用量不能超过0.5μg/μL
c.  选择合适的N/P。作为通用方法，推荐使用N/P=6-8(i.e.0.12 to 0.16μL of in vivo-jetPEI^®per ug of nucleic acid)
d.  根据下表计算对应的in vivo-jetPEI用量

 

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2）实验流程：
a.  用10%葡萄糖原液和无菌水将核酸用5%葡萄糖(射终浓度)稀释至注射体积的1/2，轻轻涡旋或上下移液混合
b.  将in vivo-PEI涡旋5秒，瞬离
c.  用10%葡萄糖原液和无菌水将in vivo-jetPEI稀释至注射体积的1/2，轻轻涡旋或上下移液混合
d.  立即将稀释好的in vivo-jetPEI加入稀释好的核酸中，轻轻涡旋或上下移液混合
e.  室温孵育15min，形成的复合物在室温可稳定4h，在4℃可稳定7天
f.   在对动物进行注射前，转染复合物必须先置于室温平衡。如有需要，注射最多可每周重复3次
g.  在合适的时间点进行基因表达检测，通常在注射后6-72h，具体的时间点取决于注射方式和靶向器官

3）举例：以小鼠静脉注射为例，单次注射体积为200μL(质粒DNA用量为40μg，N/P=8)
a.  用50μL 10%葡萄糖溶液稀释40μg质粒DNA，添加50μL无菌水补足至100μL，轻轻涡旋，瞬离
b.  用50μL 10%葡萄糖稀释6.4μL in vivo-jetPEI，添加50μL无菌水补足至100μL，轻轻涡旋，瞬离
c.  立即将稀释好的in vivo-jetPEI加入至稀释好的DNA中，轻轻涡旋，瞬离
d.  室温孵育15min
e.  在对动物进行注射前，转染复合物必须先置于室温平衡
f.   检测基因表达

 

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