2.2.1  体内专用转染试剂：in vivo-jetRNA+

最终注射体积重mRNA的浓度不超过0.3μg/μL。为了优化更好的实验条件，推进使用化学修饰mRNA。如果使用非商业mRNA，必须添加额外的清洗步骤，以去除残留的盐，从而防止沉淀发生。此外，需要使用无RNA酶的水稀释、等分mRNA。mRNA : in vivo-jetRNA+=1:2(μg mRNA:μL reagent)。需注意，此比值不能低于1:1.5

 

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mRNA和in vivo-jetRNA+复合物的准备需要在无菌环境中进行，且必须搭配使用in vivo-jetRNA+试剂盒中提供的mRNA Buffer

1） 提前确定实验方案和参数：
a.  根据不同注射用量推荐表，确定每只动物最终复合物的注射体积
b.  根据不同注射用量推荐表，确定mRNA用量
c.  根据不同注射用量推荐表，确定相应的in vivo-jetRNA+体积
d.  推荐提前准备注射预混液以确保复合物混合均匀，最小预混液体积为20μL
Note: 注射体积中的最终mRNA浓度不应该超过0.3μg/μL

2） 实验流程：
a.  在注射当天，室温平衡in vivo-jetRNA+和mRNA缓冲液，以获得最佳复合物，并在冰上解冻mRNA
b.  使用mRNA Buffer稀释mRNA，buffer的体积=注射终体积-步骤e中使用到的in vivo-jetRNA+和mRNA体积和，上下移液混合
c.  以静脉注射为例：使用170μL mRNA buffer溶解10μg mRNA(1μg/μL)，再加入20μL in vivo-jetRNA+
d.  涡旋 in vivo-jetRNA+ 5s
e.  立即将in vivo-jetRNA+加入稀释好的mRNA中(mRNA : in vivo-jetRNA+=1:2(μg mRNA : μL reagent))，轻轻上下移液混合均匀，不要涡旋。可能会出现一些浑浊，但只要没有观察到沉淀，转染复合物就可以安全使用
f.  室温孵育15min
g.  在对动物进行注射前，转染复合物必须先置于室温平衡。复合物在室温可稳定3天(不要在冰上进行转染复合物的孵育)
h.  在合适的时间点进行基因表达检测，通常在注射后6-72h

 

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