实验步骤
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子板准备
准备新的96孔板，每孔加入~160μL 2x LB低盐肉汤培养基(含8%甘油，25μg/μL Zeocin，100μg/mL carbenicillin）
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母板准备
将母板从冰箱中取出，在甘油菌还处于凝固状态时撕开封口膜，尽可能减少交叉污染，不揭开板盖的情况下等待母板内容物溶解，溶解后，用蘸有乙醇的纸巾擦拭盖子下面的凝结物
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母板复制操作
a. 轻轻地将移液器枪头置于解冻的母板孔中，并在孔内轻轻移动以混合培养物，一定要确保刮到板孔的底部
b. 轻轻将枪头从母板中取出，并轻轻放入准备好的目标子板中，以同样的方式混匀
c. 弃掉移液器枪头
d. 分别盖上母板和子板的盖子
e. 重复以上步骤，直至文库中所有母板完成复制
f. 将母板放回-80℃冰箱
g. 将接种好的子板置于30℃培养箱培养18-19h
Note: 置于-80℃长期保存，避免室温放置过长时间。由于病毒载体存在重组趋势，建议尽可能短的孵育时间，避免传代培养 -
96孔板质粒制备的培养条件
准备96孔深孔板，每孔添加1mL 2x LB低盐肉汤(含100μg/mL carbenicillin）, 添加1μL溶解好的甘油菌。37℃，170-200rpm震荡培养，18-19小时后可提取到更高的质粒产量。对于质粒制备，请遵循质粒分离试剂盒制造商推荐的方案，推荐Qiagen™Turbo™Kit(Cat #27191)
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Dhamamcon可提供的Lentiviral shRNA甘油菌质粒文库
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