实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
-
子板准备
准备新的96孔板，每孔加入~160μL 2x LB肉汤培养基(含8%甘油，100μg/mL carbenicillin)
-
母板准备
将母板从冰箱中取出，在甘油菌还处于凝固状态时撕开封口膜，尽可能减少交叉污染，不揭开板盖的情况下等待母板内容物溶解，溶解后，用蘸有乙醇的纸巾擦拭盖子下面的凝结物
-
母板复制操作
a. 轻轻地将移液器枪头置于解冻的母板孔中，并在孔内轻轻移动以混合培养物，一定要确保刮到板孔的底部
b. 轻轻将枪头从母板中取出，并轻轻放入准备好的目标子板中，以同样的方式混匀
c. 弃掉移液器枪头
d. 分别盖上母板和子板的盖子
e. 重复以上步骤，直至文库中所有母板完成复制
f. 将母板放回-80℃冰箱
g. 将接种好的子板置于30℃培养箱培养18-19h
h. 置于-80℃长期冻存 -
Dharmacon可提供的Edit-R Arrayed Lentiviral sgRNA文库
人 基因数 Human Edit-R - Druggable Genome 7826 Human Edit-R - Drug Targets 3737 Human Edit-R - G Protein-coupled Receptors 381 Human Edit-R - Ion channels 348 Human Edit-R - Phosphatases 253 Human Edit-R - Proteases 478 Human Edit-R - Protein Kinases 698 Human Edit-R - Transcription Factors 1507 Human Edit-R - Ubiquitin Conjugation 583