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3.3.3  cDNA/ORF文库

3.3.2  Lentiviral sgRNA文库

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1

    子板准备

    准备新的96孔板,每孔加入~160μL 2x LB肉汤培养基(含8%甘油,100μg/mL ampicillin)

  • 2

    母板准备

    将母板从冰箱中取出,在甘油菌还处于凝固状态时撕开封口膜,尽可能减少交叉污染,不揭开板盖的情况下等待母板内容物溶解,溶解后,用蘸有70%乙醇的纸巾擦拭盖子下面的凝结物

  • 3

    母板复制操作

    a.  轻轻地将移液器枪头置于解冻的母板孔中,并在孔内轻轻移动以混合培养物,一定要确保刮到板孔的底部
    b.  轻轻将枪头从母板中取出,并轻轻放入准备好的目标子板中,以同样的方式混匀
    c.   弃掉移液器枪头
    d.   分别盖上母板和子板的盖子
    e.   重复以上步骤,直至文库中所有母板完成复制
    f.    将母板放回-80℃冰箱
    g.   将接种好的子板置于30℃培养箱培养24h
    h.   置于-80℃长期冻存

  • 4

    Dharmacon可提供的cDNA/ORF文库

     

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