2.1 THP-1极化

①根据细胞生长状态和形态取2～4代细胞进行实验。收集形态典型、生长状态良好的THP-1进行实验[THP-1细胞呈单个圆形悬浮，密度约(5～10)×10⁶/mL,分布均匀，折光度较好]。

 

②THP-1细胞使用含有10%胎牛血清、1%谷氨酰胺、1%双抗(青霉素和链霉素配制)的1640培养基，在37℃、5%CO₂的细胞培养箱内培养，每12～16h观察一次。

 

③待细胞到达对数生长期时(培养约24～36h后)，用1640培养基调整细胞浓度为6×10⁵个/孔接种于6孔板中，加入PMA，调整PMA最终浓度依次为0、10、20、50、100、200ng/mL，最后补充1640培养基至2mL,以0ng/mL PMA孔作为阴性对照孔。

 

④培养24h后观察各孔细胞贴壁、形态变化情况并摄影。当细胞形态由单个圆形悬浮细胞，逐渐变为贴壁、形态不规则并伸出伪足，综合观察比较各孔分化形态和分化比例，以确定PMA诱导THP-1分化的优化浓度，以分化细胞比例大的和巨噬细胞形态典型的为优。

 

⑤确定最优PMA浓度后，使用此PMA浓度分别诱导THP-1细胞0、24、48、60h后再次观察各孔细胞形态变化并摄影，综合观察比较各孔分化形态和分化比例，以确定PMA诱导THP-1分化的优化作用时间，其中0h作用孔作为阴性对照孔。细胞培养严格无菌操作"若有污染则弃去细胞" 重新复苏。