实验步骤
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抗炎细胞因子
炎症受到多种抑制剂和拮抗剂的严格调控。巨噬细胞释放的抗炎细胞因子主要包括IL-10和TGF-β。IL-10是一种35kD的细胞因子,由活化的巨噬细胞、B细胞和T细胞产生。它的主要作用是抑制巨噬细胞活化,以及TNF、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12和GM-CSF的产生。IL-10可抑制活化巨噬细胞MHC-II表达,因此是抗原呈递的强效抑制剂。巨噬细胞本身也受到IL-10的影响,当巨噬细胞暴露于IL-10这种细胞因子会降低它们的杀微生物活性,并降低它们对IFN-γ的反应能力。TGF-β与IL-10一起,是另一种强大的抗炎细胞因子,作用于许多靶细胞,并能调和TNF、IL-1β和IL-12等炎症作用。TGF-β是Th1和Th2细胞的强效抑制因子,但却能促进Tregs的功能。TGF-β还与造血有关,在胚胎发生、组织再生、细胞增殖和分化中具有重要作用。
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M1细胞
Cytokine: TNF,IL1B,IL-6,IL-12,IL-23
Chemokine: CCL2,CCL3, CCL4, CCL5, CCL8,
CCL9,CCL10, CCL11M2细胞
Cytokine: IL-10,TGF, IL-6, IL-1B
Chemokine: CCL17,CCL22,CCL24,CCL1趋化因子
趋化因子是一种特殊的肝素结合细胞因子家族,能够在趋化作用的过程中引导细胞迁移。趋化因子在控制免疫细胞趋化方面起着至关重要的作用。此外,一些趋化因子在发育过程中发挥作用,促进血管生成,或引导细胞到组织中,为细胞的分化提供关键信号。巨噬细胞释放的趋化因子主要包括CXCL1、CXCL2、CCL5、CXCL8(IL-8)、CXCL9、CXCL10和CXCL11。
细胞因子检测
IF WB 样本类型 组织切片 细胞/组织裂解液 检测指标 多 多 灵敏度 ++ + 研究切入点 组织微环境相关原理/机制/影响 信号通路蛋白水平变化 动态分析 × × 特点 原位展示+定量分析双重优势 定性或半定量确定细胞或组织中蛋白质的表达情况 ABarray Luminex 样本类型 提取物、细胞培养上清、血清血浆 血清血浆、组织/细胞裂解液、脑脊液、其它 检测指标 多 多 灵敏度 + +++ 研究切入点 指标初步探索 细胞功能蛋白水平变化 动态分析 × × 特点 高通量初筛利器,涵盖多种信号通路 高自由度组合,多指标 CBA MSD 样本类型 血清血浆、组织/细胞裂解液、脑脊液、其它 血清血浆、组织/细胞裂解液、脑脊液、其它 检测指标 多 多 灵敏度 +++ ++++ 研究切入点 细胞功能蛋白水平变化 细胞功能蛋白水平变化 动态分析 × × 特点 不受孔板限制,自由度高 高灵敏度,适合精准靶标定量分析 FCM-ICS ELISPOT 样本类型 细胞悬液 细胞悬液 检测指标 多 ELISPOT(单),FluoroSpot(多) 灵敏度 +++ ++++ 研究切入点 细胞功能 细胞功能 动态分析 ✔ :阻断处理4-6h内累积在胞内的细胞因子 ✔ :刺激期间累积分泌的细胞因子 特点 单细胞水平/分泌因子细胞的占比分析、细胞功能/表型分析 单细胞水平活细胞功能检测,全过程动态评估