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2.4.1 凋亡事件1: Annexin V / 细胞膜 PS 外翻

| 2.4.2 凋亡事件2:凋亡中的线粒体功能变化

凋亡细胞在早期Phosphatidyl-serine(PS)会由细胞膜内外翻至膜外,利用Annexin V通过流式或电镜能够检测到PS的外翻。

 

△点击放大图片

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 1

    流式实验步骤:

    取流式管,按顺序编好阴性对照管(空白管、阴性管、单阳管)和样本管号,用冷的PBS洗细胞2次,用1×binding buffer制成1×106/ml细胞悬液


    流式管中分别加入100ul细胞悬液,单阳管中分别加入样本管加入5μl Annexin V-FITC10μl  PI碘化丙啶轻轻混匀


    样本管加入5μl Annexin V-FITC,轻轻混匀;再加入10μl PI


    室温(20-25°C)避光孵育10-20分钟,随后置于冰浴中


    即可上机检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,碘化丙啶(PI)为红色荧光


    tips:

    如果用药物作用于细胞,建议将药物浓度、作用时间设置为不同梯度

  • 2

    流式实验结果:

    △点击放大图片


    1. Annexin V-FITC标示外翻的PS,再合并以PI进行的死亡细胞的染色,以区分三种细胞。


    2. 凋亡细胞可被Annexin V-FITC染成绿色,但对PI拒染;


    3. 已死亡或Apoptosis后期的细胞因细胞膜已破损会同时染上Annexin V-FITCPI;

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