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细胞自噬的介绍
autophagy又叫做Ⅱ型程序性细胞死亡,是指细胞利用溶酶体降解、选择性地清除自身受损、衰老或过剩的生物大分子和细胞器，释放出游离小分子供细胞回收利用的正常动态生命过程。自噬被认为是机体的一种自我保护机制。
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实验步骤
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细胞自噬的三种形式
微自噬（microautophagy)
细胞器或是内含物的囊泡直接与溶酶体相互作用并融合，微自噬比巨自噬更具特异性，可由受损细胞器表面的信号分子触发。
巨自噬（macroautophagy）
细胞的整个区域被包围在双膜小泡的自噬体中，这些自噬体然后与溶酶体融合成为自噬溶酶体，其内容物随后被其中的蛋白酶降解。
介导自噬(Chaperone-mediated autophagy，CMA）
也称为伴侣介导的自噬，胞质内的蛋白质通过胞质伴侣与溶酶体融合，通过分子伴侣与底物氨基酸序列内的五肽相互作用，例如底物蛋白与溶酶体LAMP-2A，并被转运到溶酶体中进行
降解。特点 巨自噬 微自噬 分子伴侣介导的自噬 激活方式 压力与应激 组成性 压力与应激 物种 哺乳类动物 存在 存在 存在 非哺乳类动物 存在 存在 ？ 机制 膜来源 非溶酶体 溶酶体 无膜来源 内吞 是 是 否 受体介导 否 否 是 参与成分 ATP 是 是 是 GTP和GTP酶 是 是 否 细胞骨架 是 否 ？ 分子伴侣 否 否 是 PI3K 是 ？ 否 底物 细胞器 各种类型 各种类型 无 可溶性胞质蛋白 各种类型 各种类型 KFERQ-标签 蛋白折叠方式 折叠 折叠 去折叠 选择性 部分 部分 所有 -
细胞自噬的检测方法
如何测量自噬
细胞自噬标记物 检测方法 Lc3、ATg12-ATg5复合Beclin、mTOR、Bcl-2 WB、IHC、PCR、FC流式 P62 WB、IHC、FC流式 AMPK通路 WB、IHC、phosFlow P53 WB、IHC、EliSA、FC流式 WB实验案例说明
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Expression of Beclin-1, LC3II, LC3I, and p62 in different tumor tissues as determined by WB. GAPDH was served as the internal control.
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流式案例
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Jurkat and K562 cell lines were untreated or treated with rapamycin (80 nM R), CQ (25 or 50 lM), low serum and nutrient free conditions for 24 and 48 h. Cells werelabelled with anti-LC3B-Alexa Fluor647 (or isotype-Alexa Fluor647) or LTG (50 nM) at 24 and 48 h