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4.3 焦亡中的炎症小体

| 5.1 坏死性凋亡

视频素材来源于YouTube  https://youtu.be/2812ion3aUk
版权归原作者所有


炎症小体(Inflammasome)是由感应器、适配器和酶原Proaspase-1组成的多聚蛋白复合物。炎症小体的组装是天然免疫细胞对病原体相关分子模式(PAMP)和损伤相关分子模式(DAMP)的反应。炎性小体通过引起Caspase-1自我剪切,活化,进而裂解Pro-IL-1βPro-IL-18形成成熟IL-1βIL-18
现已检测到许多不同的炎性体复合体,每个复合体有独特的 PRR 和激活触发物。特征最明显的是 NLRP3 复合体,它含有 NLRP3、ASC、pro-caspase-1 丝氨酸-苏氨酸激酶 NEK7

 

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第一步初始化:PAMPDAMP 介导的 TLR4TNFR 激活会诱导 NF-kB 信号转导,导致 NLRP3pro-IL-1β pro-IL-18 表达升高
(引导步骤,信号 1)。
 
第二步激活组装:大量信号(全病原体、PAMP/DAMP、钾外流、溶酶体损坏的环境因子 [尿酸、硅和明矾]、内源性因子 [淀粉样蛋白 β、胆固醇结晶] 和线粒体损害)会间接激活 NLRP3,导致复合体组装和 caspase-1 激活(信号 2)。蛋白组分之间的结构域相互作用会形成复合体炎性体结构。

 

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实验步骤

  • 1
  • 2
  • 1

    如何测量细胞焦亡

    细胞焦亡标记物

    细胞焦亡标记物描述

    检测方法

    ▲ 炎性小体形成

    细胞焦亡特点的是炎性体的形成;炎性体的标记物是 NLRP3

    WB

    ▲ Caspase-1 活性

    细胞焦亡期间发生 caspase-1 的剪切

    WB、FC流式、IHC

    ▲ Gasdermin D 剪切

    细胞焦亡期间发生 gasdermin-D 剪切

    WB、IHC

    Caspase-4,5,11

    细胞焦亡期间发生 caspase-4,5,11的剪切

    WB、FC流式、IHC

    IL-1 Beta,IL-18

    细胞焦亡期间发生炎症因子的释放

    WB、FC流式、EliSA

  • 2

    WB&流式

    WB实验案例
    The protein level of NLRP3/caspase-1p45/caspase-1p20/GSDMD/GSDMD-C/IL-1β p31/IL-1β p17/IL-18 was measured by Western blot analysis(不同浓度的atorvastatin&不同的处理时间)

     

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    流式案例
    在不同辐射程度下的BMDM样本显示出焦亡的比例有所增加

     

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