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炎症小体(Inflammasome)是由感应器、适配器和酶原Proaspase-1组成的多聚蛋白复合物。炎症小体的组装是天然免疫细胞对病原体相关分子模式(PAMP)和损伤相关分子模式(DAMP)的反应。炎性小体通过引起Caspase-1自我剪切,活化,进而裂解Pro-IL-1β、Pro-IL-18形成成熟IL-1β、IL-18。
现已检测到许多不同的炎性体复合体,每个复合体有独特的 PRR 和激活触发物。特征最明显的是 NLRP3 复合体,它含有 NLRP3、ASC、pro-caspase-1 和丝氨酸-苏氨酸激酶 NEK7。
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第一步初始化:PAMP 或 DAMP 介导的 TLR4 或 TNFR 激活会诱导 NF-kB 信号转导,导致 NLRP3、pro-IL-1β 和 pro-IL-18 表达升高
(引导步骤,信号 1)。
第二步激活组装:大量信号(全病原体、PAMP/DAMP、钾外流、溶酶体损坏的环境因子 [尿酸、硅和明矾]、内源性因子 [淀粉样蛋白 β、胆固醇结晶] 和线粒体损害)会间接激活 NLRP3,导致复合体组装和 caspase-1 激活(信号 2)。蛋白组分之间的结构域相互作用会形成复合体炎性体结构。
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实验步骤
- 1
- 2
如何测量细胞焦亡
细胞焦亡标记物
细胞焦亡标记物描述
检测方法
▲ 炎性小体形成
细胞焦亡特点的是炎性体的形成;炎性体的标记物是 NLRP3
WB
▲ Caspase-1 活性
细胞焦亡期间发生 caspase-1 的剪切
WB、FC流式、IHC
▲ Gasdermin D 剪切
细胞焦亡期间发生 gasdermin-D 剪切
WB、IHC
Caspase-4,5,11
细胞焦亡期间发生 caspase-4,5,11的剪切
WB、FC流式、IHC
IL-1 Beta,IL-18
细胞焦亡期间发生炎症因子的释放
WB、FC流式、EliSA
WB&流式
WB实验案例
The protein level of NLRP3/caspase-1p45/caspase-1p20/GSDMD/GSDMD-C/IL-1β p31/IL-1β p17/IL-18 was measured by Western blot analysis(不同浓度的atorvastatin&不同的处理时间)△点击放大图片
流式案例
在不同辐射程度下的BMDM样本显示出焦亡的比例有所增加△点击放大图片