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细胞周期&细胞增殖常见实验方法
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细胞周期&细胞增殖概述
细胞增殖是指细胞分裂（细胞质分裂）引起的细胞数量增加，是细胞周期的最后一步。细胞增殖在生命周期中正常组织发育和维持是必须的。
细胞增殖是一个严格调控的过程，许多不同的蛋白质控制着细胞周期检查点。在癌细胞中发现的基因突变会导致不受控制的细胞增殖。
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如何测量细胞增殖
细胞周期由多个阶段组成，包括细胞大小增加的 G1 期、新合成 DNA 的 S 期、细胞进一步生长的 G2 期，最后是细胞最终分裂的 M 期或有丝分裂期。一些细胞退出细胞周期并停止分裂；这称为静止或静息状态 (G0)
细胞周期各阶段：G1 - 大小增加；S - DNA 合成和复制；G2 - 生长；M - 有丝分裂和细胞分裂；G0 - 休眠期。测定法
测量内容
BrdU Cell
Proliferation Assay Kit
测量细胞增殖期间发生的 DNA 合成水平
细胞增殖指示剂试剂盒
通过流式细胞仪使用胺反应性染料和染料稀释原理测量细胞分裂，以追踪多轮细胞增殖
碘化丙啶7-AAD
基于其 DNA 的特征量化细胞周期不同阶段的细胞数。
增殖标记物 增殖标记物描述 增殖细胞核抗原 (PNCA) 在 DNA 复制中起重要作用的滑动 DNA 夹蛋白 Ki-67 仅在增殖细胞中高水平表达的非核组蛋白 磷酸化组蛋白 H3 在增殖细胞中磷酸化的核组蛋白 β-半乳糖苷酶活性 β-半乳糖苷酶活性与不增殖的衰老细胞有关 -
MTT原理：
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。 -
CCK-8
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
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ATP浓度检测
ATP浓度监测可指示细胞损伤、细胞增殖以及细胞增殖抑制效果的良好指标，且比传统方法更为方便和精确。
ATPlite™ 1step检测系统利用萤火虫萤光素酶检测ATP，进而检测哺乳动物细胞的细胞增殖和细胞毒性。活细胞生成的ATP与萤光素酶和萤光素反应，促使发光。通过检测细胞中的ATP量的变化，可评估细胞数量的增减情况 -
BrdU
BrdU是DNA前体胸腺BrdU是胸腺嘧啶T的类似物，在培养细胞过程中在培养基中加入BrdU，BrdU在合成DNA过程中会随机插入到DNA中，之后对细胞固定破膜，用DNA酶处理之后，用BrdU的抗体进行染色，即可得到细胞增殖的结果。
用迪霉素 (DNA聚合酶抑制剂) 处理Hela细胞，并用BrdU染色分析细胞周期。右图为在BD PathwayTM生物成像系统上拍摄并用BDAttovisionTM软件分析得到的结果。
Hoechst – 蓝色
BrdU – 红色
Histone H3 (pS28) – 黄色
Tubulin – 绿色
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VPD450/CFSE
CFSE或VPD450是细胞增殖染料，细胞质会与染料结合，分裂一代之后胞浆内染料浓度减半，再次分裂，胞浆内染料浓度降低为原来的四分之一。随着分裂代数的增加，染料浓度逐渐降低，荧光强度降低。
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