免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，而无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，进而使细胞得以分离。
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实验步骤
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分选介绍
●阳性选择: 磁珠标记的细胞为目的细胞，简单、快速。分选完后磁珠无需解离，可直接用于后续实验：包括培养、分析、功能实验。
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●去除分选——分选“未接触细胞”磁珠标记在非目的细胞上。
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产品名称 分选策略 CD4 MicroBeads, human 阳性分选 CD4+T Cell Isolation Kit, human 阴性分选 CD4 (L3T4) MicroBeads, mouse 阳性分选 CD4+T Cell Isolation Kit, mouse 阴性分选 CD8 MicroBeads, human 阳性分选 CD8+T Cell Isolation Kit, human 阴性分选 CD8a (Ly-2) MicroBeads, mouse 阳性分选 CD8a+T Cell Isolation Kit, mouse 阴性分选 Pan T Cell Isolation Kit, human 阴性分选 Pan T Cell Isolation Kit II, mouse 阴性分选 Naive CD4+T Cell Isolation Kit II, human 阴性分选 Naive CD4+T Cell Isolation Kit, mouse 阴性分选 CD4+CD25+Regulatory T Cell Isolation Kit, human 阴性分选 CD4+CD25+Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse 阴性分选 
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以Treg分选为例：先去除再阳性分选获得Treg细胞（小鼠)
步骤一: 去除非CD4+T细胞
(1)用CD4+CD25+ Regulatory T Cell Biotin-Antibody Cocktail,和抗生物素的磁珠，间接标记非CD4+T细胞(例如:CD8a,CD11b,CD45R,CD49b,and Ter-119)
(2)用LD分选柱去除分选获得CD4+T细胞步骤二:阳选获得CD4+CD25-或CD4+CD25+细胞
(3)用CD25-PE和抗PE磁珠，间接标记细胞CD4+CD25+T细胞
(4)用MS分选获得CD4+CD25-(流下来的成分)或CD4+CD25+细胞(挂在柱子上的成份)
(5)将CD4+CD25+细胞从分选柱上洗脱下来 -
实验材料
用途 产品名称 货号 规格 分选用磁珠 Pan T Cell Isolation Kit , human 130-096-535 Kit 分选用分选柱 MS Columns 130-042-201 25个 LD Columns 130-042-901 25个 分选用Buffer MACS BSA Stock Solution 130-091-376 6x75 mL autoMACS Rinsing Solution 130-091-222 6×1.45 L 分选用分选器 MidiMACS Separator 130-042-302 1 piece QuadroMACS Separator 130-090-976 1 piece 分选用分选架 MACS MultiStand 130-042-303 1 piece -
操作步骤
步骤一: 去除非CD4+T细胞
(1)细胞计数
(2)300xg离心10分钟，弃去上清
(3)用40μL Buffer重悬细胞
(4)加入10μL CD4+CD25+ Regulatory T Cell Biotin-Antibody Cocktail
(5)在2-8°C冰箱中混育10分钟
(6)加入30μL Buffer，20μL Anti-Biotin MicroBeads,10μL CD25-PE
(7)在2-8°C冰箱中混育10分钟步骤二: 上LD分选柱分选
(1)将LD分选柱安装在分选器合适位置，用2ML Buffer缓冲液润柱
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(2)将样本加在分选柱上方，待样本快流完是用2mL的Buffer洗柱子，重复1-2次
(3)收集流下来的成份即为CD4+T细胞步骤三: 磁珠标记CD25+细胞
(1)收集流下来的成份，300xg离心10分钟，弃去上清
(2)用90μL buffer重悬细胞
(3)加入10μL Anti-PE MicroBeads
(4)在2-8°C冰箱中混匀育15分钟步骤四: 上MS分选柱分选
(1)将MS分选柱放在分选器合适位置
(2)用500μL buffer润洗MS分选柱。
(3)将样本加在分选柱上，待样本快流完时用500μL的Buffer洗柱子，重复1-2次
(4)收集流下来的成份，即为CD4+CD25-细胞
(5)将分选柱移除磁场环境放在新的试管上，将1mL Buffer加到分选柱上，用分选柱配备的活塞快速坚定的将分选柱上的细胞洗脱下来，洗脱下来的成份即为CD4+CD25+细胞。
(6)为了获得更好分选效果，建议您再过一根MS分选柱。
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