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2.2 无柱式分选介绍

| 3.1 小鼠TH1、TH2、TH17诱导化分实验

免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,而无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,进而使细胞得以分离。

 

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实验步骤

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    介绍

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    T细胞常见分选产品

    产品名称 分选策略 分选目的细胞
    T Lymphocyte Enrichment Set - DM 负选 humanT细胞
    CD3 Magnetic Particles - DM 正选 humanT细胞
    CD4 T Lymphocyte Enrichment Set - DM 负选 humanT辅助细胞TH
    CD4 Magnetic Particles - DM 正选 humanT辅助细胞TH
    CD8 T Lymphocyte Enrichment Set - DM 负选 human毒性T细胞TC
    CD8 Magnetic Particles - DM 正选 human毒性T细胞TC
    T Lymphocyte Enrichment Set - DM 负选 mouse T细胞
    CD90.2 (Thy1.2) Magnetic Particles - DM 正选 mouse T细胞
    CD4 Magnetic Particles - DM 正选 mouse T辅助细胞TH
    CD4 T Lymphocyte Enrichment Set - DM 负选 mouse T辅助细胞TH
    CD8 T Lymphocyte Enrichment Set - DM 负选 mouse毒性T细胞TC
    CD8a Magnetic Particles - DM 正选 mouse毒性T细胞TC
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    实验步骤:以CD4+T分选为例

     

     

     

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    样本制备:

    1、取50mL离心管,预先加入1mL ficoll淋巴细胞分离液和1mLPBS,混合均匀,再取1mL人外周血轻轻从斜侧管壁滑下,让血铺层在分离液和PBS之上,请勿剧烈摇匀;
    2、800G离心30分钟,轻柔取出后,用枪头取中间絮状粘膜层PBMC,也可把上清吸去,再用枪头吸取PBMC,装入新的15mL离心管中备用:
    3、用去离子水或无菌蒸馏水1:10稀释BDIMag" Buffer(10X)(Cat.No.552362)成X工作浓度备用;

     

    孵育:

    4、细胞计数后,加入1mL工作浓度的1XBD Mag"Buffer,200G/1200rpm离心5分钟,轻柔的吸去上清
    5、Vortex混匀CD4磁珠,在PBMC沉淀中加入磁珠,每10^7个细胞加入50μL;
    6、混匀即可,室温孵育30分钟;
    7、用1X工作浓度的BDIMag"Buffer补充液面至细胞数为1-8X10^7cell/m,然后立刻放置在BD Magnet"磁力架上8-10分钟

     

    分离洗脱:

    8、保持tube在磁力架上不动,小心吸去上清,上清中包含阴性细胞;
    9、从磁力架上移除tube,加入1mL工作浓度的1X BDMag"Buffer,用移液枪轻轻吹打,然后重新放置在磁力架上,孵育2-4分钟
    10、保持tube在磁力架上不要移动,小心吸去上清弃掉:
    11、重复步骤9和10
    12、清洗过后,现在可以把tube从磁力架上移除,加入合适的bufer重悬阳性细胞,现在您可以进行纯度回测或是其他后续操作步骤,分选结束

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