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9.1 T细胞信号分析的工具:Phosflow

| 10.1 细胞因子运量检测方法:CBA

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T细胞由大量信号转导分子的复杂信号通路所激活和包括抗原和细胞因⼦的受体、激酶和转录因子。当外源抗原进入机体时,它们被内源免疫系统识别,引起免疫细胞表面表达共刺激分子并分泌细胞因子。

 

这些表达的分子通知适应性免疫系统入侵病原菌的类型和强度。然后,内源性CD4+T细胞分化成Th1、Th2、Th9、Th17、Tfh或Treg 细胞

 

T细胞分化受蛋白磷酸化调节。不同的细胞因子与由内源T细胞表达的同源受体相结合,可以导致激活蛋白(包括信号转换器和转录(Stat)蛋白激活剂的磷酸化和二聚化。经过磷酸化二聚化.激活的Stat蛋白进入细胞核内,结合在很多不同基因的启动子上,导致其他转录因子和特定T细胞亚型相应细胞因子的表达。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 1

    BD Phosflow技术

    同时分析多种胞内磷酸化蛋白和细胞表面标记分子,进而得到各个群体细胞中信号转导的多种信息。即对单个细胞的胞内信号转导事件进行详尽的研究实验步骤如下:

     

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    Activator (response modifier) Phosphorylation marker
    PMA  ERK 1/2, p38MAPK
    hIFN- α  Stat1
    hIL-6  Stat3
    hIL-2  Stat5
    hIL-4  Stat6

     

     

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    上边直方图(利用Cytobank软件)显示BD Phosflow T Cell Activation kit 监测CD4+和CD8+T细胞对处理产生的信号应答。刺激因子见上表。

  • 2

    所需辅助试剂

    货号 产品名称 规格
    558049 BD Phosflow™ Lyse/Fix Buffer5X 250ml
    558050 BD Phosflow™ Perm Buffer III 125ml
    554655 BD Cytofix™ Fixation Buffer 100ml

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