实验步骤
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制备流程
1.研磨
分离整个肝脏组织后，剪去胆囊，将肝脏组织放在6cm培养皿中，加入3-4ml PBS，用2ml注射器推杆后柄研磨组织，肝组织匀浆过70μm细胞筛网；
2.离心
将组织匀浆放入离心管中，1500rpm，4℃，离心10分钟，弃上清；
3.梯度离心
在15ml离心管中加入5ml 80% Percoll，将上一步离心弃上清的细胞重悬于5ml 40% Percoll中，充分混匀；用一次性吸管小心将40% percoll细胞混悬液铺在80% Percoll上；室温750g离心，20min；之后吸取白膜层细胞。(如果小鼠肝脏组织较大，每份样本可以分两管梯度离心)
4.润洗细胞
离心后吸取白膜层细胞，加入5-10ml PBS，1500rpm离心，10min，4℃，2次
5.细胞重悬于流式染色buffer中
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Percoll
经过聚乙烯吡咯烷酮(PVP)处理的硅胶颗粒混悬液，对细胞无毒性和刺激性。混悬液经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的细胞分离纯化。
等渗Percoll
将1份10xPBS与9份Percoll贮存液混合，此悬液被认为是100%Percoll悬液，其密度为1.1294g/ml。用PBS或细胞培养液稀释100%Percoll而获得所需密度的Percoll分离液用于相应细胞的。