实验步骤
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试剂&耗材准备
产品名称 备注 磷酸盐缓冲液（PBS） pH 7.2 EDTA 2 mM Ficoll-Paque (abs930) 1.074 -
梯度密度离心PBMC获得
注意：外周血或血沉棕黄层不应超过8小时，并应补充抗凝剂(例如肝素，EDTA，柠檬酸盐，ACD-A或柠檬酸盐磷酸右旋糖(CPD))。
1.用PBS-EDTA缓冲液体积的2-4倍稀释细胞。
▲注意：血液样本越稀释，单核细胞的纯度越好。
2.在50ml锥形管中的15ml Ficoll-Paque™上小心地铺上35ml稀释的细胞悬液。
3.在不带制动器的摆桶式转子中，在20°C下以400×g离心30–40分钟。
4.吸出上层，使单核细胞层(淋巴细胞，单核细胞和血小板细胞)在相间不受干扰。
5.小心地将单核细胞层转移到新的50ml锥形管中。
6.在20°C下以300×g离心10分钟。小心地彻底去除上清液。
7.为了除去血小板，将细胞沉淀重悬于50ml PBS-EDTA中，并在20°C下以200×g离心10–15分钟。小心地彻底去除上清液。
8.重复步骤7。大多数血小板在200×g离心后仍保留在上清液中。
9.箱中存放超过一天的细胞。进行磁性标记之前，请至少清洗一次，然后将细胞重悬在适当的缓冲液中。
▲注意：PBMC可能会在冰箱中用含有0.5％BSA或自体血清的PBS储存过夜。
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