18.1 Sample Preprocessing Percoll

Percoll：是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒
原理： 根据不同细胞的密度，两种不同的Percoll浓度，把要的细胞夹在中间；
原浓度不是100%，我们需要用10%的10xPBS稀释90%的Percoll(1.1294)；

 

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Percoll浓度(％)	70	60	50	40	30	20
比重g／ml	1.09	1.077	1.067	1.056	1.043	1.031

 

 

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如何选择不同密度的ficoll&percoll？

实验类型	目的细胞	对应产品
人外周血单个核细胞分离	单个核细胞（T、DC、NK）	Ficoll plus Ficoll premium 1.007
人脐带血单个核细胞	单个核细胞、干细胞初分	Ficoll plus Ficoll premium 1.007
人间充质干细胞分离	间充质干细胞（MSC）	Ficoll premium 1.084
人低密度细胞分离	基质细胞等	Ficoll premium 1.073
大鼠、小鼠血液、骨髓细胞分离	单个核细胞（T细胞、DC等）	Ficoll premium 1.084
通用细胞分离	各类细胞	Percoll or percoll plus
其他生物组织分离	细胞器、病毒等	Percoll or percoll plus

死细胞去除试剂盒(Dead Cell Removal Kit, 130-090-101)基于磁珠分选原理，通过识别凋亡和死亡细胞膜特异性标记物，精确获取并去除，从而达到提升样品活细胞比例的目的，保证单细胞测序结果的真实性和可重复性。
步骤一： 细胞计数；
步骤二： 300xg离心10min，弃上清；
步骤三： 加入Dead Cell Removal MicroBeads混匀，室温孵育15min；
步骤四： 上分选柱分选，收集阴性成分，即为活细胞。

 

死细胞去除试剂盒Dead cell remove kit特点：

1.最小的细胞损失；
2.操作简单，只需两步：标记-分离；
3.耗时短：只需25min；
4.高活性的样本：死细胞去除后细胞活性可以达到85%-95%；

 

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对Jurkat细胞使用死细胞去除试剂盒进行死细胞去除操作，通过磁性标记死细胞并经过LS分离柱，死细胞得以去除。图中所示，死细胞使用碘化丙啶染色。

 

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MACS^® 磁性分选示意图

 

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基本原理：用MACS^®超顺磁性微珠磁性标记细胞或生物分子，然后在高强度、梯度磁场中，通过MACS^®分选柱分离出目的细胞。

MACS starting kit(细胞分选起始套装)

 

白细胞分选产品推荐：

Product name	Catalog no.	Size
CD45 MicroBeads, human	130-045-801	for 1×109 total cells
CD45 MicroBeads, mouse	130-052-301	for 2×109 total cells

 

MACS技术优势：
· 高纯度、高回收率(平均纯度和回收率在90％以上)
· 操作简单、无需专人操作，可随时使用。
· 分选后细胞活性好(>90%)，细胞功能无改变，无需剪切，可直接做后续实验或者回输。
· 无菌分选：仪器小巧，可以进操净台，耐受紫外线照射，消毒方便，耗材为无菌性包装。
· CliniMACS是目前唯一一个通过临床认证，可以将分选后细胞回输给人的仪器。

 

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1.长期储存选择： 在-80°C缓慢冷冻，如DMSO快速冷冻（仅恢复细胞核）；

2.短期存储（最多48小时）： 在4°C的MACS组织存储解决方案中存储；

3.产品： MACS组织保存溶液(MACS Tissue Storage Solution，130-100-008)可保证组织于2~8 ℃避光条件下维持新鲜长达48小时；

4.可以有效避免细胞凋亡和坏死；

5.维持细胞正常功能： 如干细胞可保持其分化潜能，免疫细胞不出现异常通路激活。