去除染色质交联之后,使用典型的酚-氯仿及随后的乙醇沉淀方法或使用DNA纯化柱试剂盒来进行DNA纯化。
以下步骤是基于用DNA纯化柱试剂盒来进行的。
准备
1) 使用前向DNA Wash Buffer中添加24ml乙醇(96-100%),此操作仅需在第一次DNA纯化前进行。
2) 对于第五部分制备的每份DNA样品,取出一支DNA纯化收集管。
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 7
- 8
- 9
- 10
- 11
- 12
- 13
混合
向每份DNA样品中添加750μl DNA Binding Buffer并短暂涡旋混合;对于每1体积样品,应当使用5倍体积的DNA结合缓冲液;
收集
从在步骤1中制备的每份样品中取出450μl并将其至收集管的DNA离心柱中;
离心
用离心机以14,000rpm离心30秒;
取出
从收集管取出离心柱并丢弃液体,离心柱再放入收集管中;
重复
从在步骤1中制备的每份样品中取出剩余的450μl并将其转移至收集管的离心柱中;重复步骤3和4;
加试剂
向收集管的离心柱中添加750μl DNA Wash Buffer;
离心
用离心机以14,000rpm离心30秒;
取出
从收集管取出离心柱并丢弃液体。离心柱再放入收集管中;
离心
用离心机以14,000rpm离心30秒;
保留
丢弃收集管和液体,保留离心柱;
加试剂
向每个离心柱中添加50μl DNA Elution Buffer并将其置于洁净的5ml微量离心管中;
洗脱
用微量离心机以14,000rpm的离心力离心分离30秒,以洗脱DNA;
保存样本
取出并丢弃DNA离心柱。洗脱物即纯化的DNA。样本可以在-20°C条件下保存。