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8.1 DNA纯化

| 9.1 PCR

去除染色质交联之后,使用典型的酚-氯仿及随后的乙醇沉淀方法或使用DNA纯化柱试剂盒来进行DNA纯化。

以下步骤是基于用DNA纯化柱试剂盒来进行的。

 

准备

1)   使用前向DNA Wash Buffer中添加24ml乙醇(96-100%),此操作仅需在第一次DNA纯化前进行。

2)   对于第五部分制备的每份DNA样品,取出一支DNA纯化收集管。

 

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 9
  • 10
  • 11
  • 12
  • 13
  • 1

    混合

    向每份DNA样品中添加750μl DNA Binding Buffer并短暂涡旋混合;对于每1体积样品,应当使用5倍体积的DNA结合缓冲液;

  • 2

    收集

    从在步骤1中制备的每份样品中取出450μl并将其至收集管的DNA离心柱中;

  • 3

    离心

    用离心机以14,000rpm离心30秒;

  • 4

    取出

    从收集管取出离心柱并丢弃液体,离心柱再放入收集管中;

  • 5

    重复

    从在步骤1中制备的每份样品中取出剩余的450μl并将其转移至收集管的离心柱中;重复步骤34

  • 6

    加试剂

    向收集管的离心柱中添加750μl DNA Wash Buffer

  • 7

    离心

    用离心机以14,000rpm离心30秒;

  • 8

    取出

    从收集管取出离心柱并丢弃液体。离心柱再放入收集管中;

  • 9

    离心

    用离心机以14,000rpm离心30秒;

  • 10

    保留

    丢弃收集管和液体,保留离心柱;

  • 11

    加试剂

    向每个离心柱中添加50μl DNA Elution Buffer并将其置于洁净的5ml微量离心管中;

  • 12

    洗脱

    用微量离心机以14,000rpm的离心力离心分离30秒,以洗脱DNA

  • 13

    保存样本

    取出并丢弃DNA离心柱。洗脱物即纯化的DNA。样本可以在-20°C条件下保存。

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