实验步骤
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孵育
向50μl染色质样品中添加100μl无核酸酶水、6μl 5M NaCl和2μl RNase A,涡旋混合,并在37℃下孵育样品30分钟;
孵育
向每份经RNase A消化的样品添加2μl Proteinase K,涡旋混合,并在65℃下孵育样品2小时;
加试剂
向DNA wash buffer添加24ml的96-100%乙醇
加试剂
向DNA样品中添加750μL DNA Binding buffer,混匀
离心
吸取450μL到离心柱中,室温14000rpm离心30秒,取出倒掉废液后重复上述步骤
离心
在每个离心柱中加入750μL的DNA wash buffer,14000rpm离心30秒
离心
取出倒掉废液后14000rpm离心30秒
标记
取出离心柱,插入到一个干净的5ml离心管中,并做好标记
加试剂,静置
在每个离心柱中加入50μL DNA Elution Buffer,室温静置2分钟
离心洗脱
14000rpm离心30秒,洗脱DNA,离心管中的洗脱液即为纯化的DNA,样品可保存在-20℃
电泳
在纯化DNA后,取出10μl样品并将其与100bp DNA标准品置于1%琼脂糖凝胶上进行电泳以确定DNA片段的大小,应当将DNA消化成大约150-900bp的长度(1至5个核小体)
稀释确定浓度
要确定DNA浓度,将2μl纯化的DNA转移到98μl无核酸酶水中,以获得50倍稀释度并读取OD260。DNA浓度(以μg/ml计)为OD260 2,500,最理想的DNA浓度应介于50-200ng/μl之间。