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5.1.4 酶解法 染色质的浓度分析(建议步骤)

| 5.2.1 超声法 胞核制备

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 9
  • 10
  • 11
  • 12
  • 1

    孵育

    50μl染色质样品中添加100μl无核酸酶水、6μl 5M NaCll RNase A,涡旋混合,并在37℃下孵育样品30分钟;

  • 2

    孵育

    向每份经RNase A消化的样品添加2μl Proteinase K,涡旋混合,并在65℃下孵育样品2小时;

  • 3

    加试剂

    DNA wash buffer添加24ml96-100%乙醇

  • 4

    加试剂

    DNA样品中添加750μL DNA Binding buffer,混匀

  • 5

    离心

    吸取450μL到离心柱中,室温14000rpm离心30秒,取出倒掉废液后重复上述步骤

  • 6

    离心

    在每个离心柱中加入750μLDNA wash buffer14000rpm离心30

  • 7

    离心

    取出倒掉废液后14000rpm离心30

  • 8

    标记

    取出离心柱,插入到一个干净的5ml离心管中,并做好标记

  • 9

    加试剂,静置

    在每个离心柱中加入50μL DNA Elution Buffer,室温静置2分钟

  • 10

    离心洗脱

    14000rpm离心30秒,洗脱DNA,离心管中的洗脱液即为纯化的DNA,样品可保存在-20℃

  • 11

    电泳

    在纯化DNA后,取出10μl样品并将其与100bp DNA标准品置于1%琼脂糖凝胶上进行电泳以确定DNA片段的大小,应当将DNA消化成大约150-900bp的长度(15个核小体)

  • 12

    稀释确定浓度

    要确定DNA浓度,将2μl纯化的DNA转移到98μl无核酸酶水中,以获得50倍稀释度并读取OD260DNA浓度(以μg/ml计)为OD260 2,500,最理想的DNA浓度应介于50-200ng/μl之间。

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