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细胞表面流式染色操作流程
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单细胞染色
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全血染色
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以人外周血单个核细胞（PBMCs）及悬浮细胞系的细胞表面染色为例
1. 在CPT管或Ficoll密度梯度离心管中制备PBMCs，然后将PBMCs或细胞系细胞重悬于BD Pharmingen Stain Buffer (BSA) 或Stain Buffer (FBS) 。
2. 每管加入1ml 预冷的BD Pharmingen Stain Buffer，300g ，4°C离心 5分钟。重复2次。用预冷的BD Pharmingen Stain Buffer 调整细胞终浓度为107 cells/ml。
3. 将100μl细胞悬液（106 细胞）转移至12 x 75mm圆底聚丙烯试管或圆底微孔板流式管中。
4. 每管加入适量特异性表面抗体，冰上避光孵育20分钟。
5. 用适量的Stain Buffer清洗细胞2次（微孔板 200μl/孔/次，试管1ml/管/次），300g离心5分钟。仔细吸去或倒掉上清。
6. 轻拍试管或微孔板混匀细胞。
7. 对于间接染色，于100μl Stain Buffer中依说明书加入适量二抗或链霉素标记的抗体，重复操作步骤4和5。
8. 适量Stain Buffer重悬细胞（微孔板 200μl/孔，试管 0.5ml/孔）。
备注：
1. PBMCs制备请参考Ficoll产品或红细胞裂解液的使用说明书。
2. 为避免非特异性染色，表面抗体加入前，先加入FCR阻断剂。(见下图)
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3. 可通过测试确定最佳的抗体使用量。根据荧光抗体活性的不同，染色时间可适当延长（> 45 min）。
4. 如果不能及时上机检测，可将已染色的细胞在4%多聚甲醛（或BD Cytofix Buffer）中4°C 固定30分钟，清洗细胞，之后用适量 Stain Buffer重悬细胞，4°C避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测。 -
染色案例
1）.Example data from a 10-color TBMNK panel T/B/单核/NK细胞10色染色案例
指标 荧光素 产品编号 CD45 V500 560777 CD14 PE-CY7 557742 CD3 V450 560365 CD19 PE 555413 CD8 APC-H7 560179 CD20 AlexaFluor700 561171 CD57 FITC 555619 CD16 PE-CF594 562293 CD56 APC 555518 
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2）. Example T/NK细胞7色染色案例
指标 荧光素 产品编号 CD3 APC-H7 560176 CD56 APC 555518 CD16 PE-CY7 557744 CD7 PE 555361 CD57 FITC 555619 CD8 BV421 562428 CD45 V500 560777 
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3色T细胞分群
指标 荧光素 产品编号 CD3 V500 561416 CD4 APC-H7 560158 CD8 PerCP-Cy5.5 565310 
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7色T细胞分群指标 荧光素 产品编号 CD3 V500 561416 CD4 APC-H7 560158 CD8 PerCP-Cy5.5 565310 CD45RA FITC 555488 CCR4 PE 551120 CD25 PE-Cy7 557741 CD127 APC 558598 
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10色T细胞分群
指标 荧光素 产品编号 CD45 PerCP-Cy5.5 564105 CD3 APC-CY7 557832 CD4 BV605 562658 CD8 BV510 563919 CD127 PE 557938 CD45RA AlexaFluor700 560673 CD25 BV421 562442 CCR7 PE-CF594 562381 CD28 BB515 564492 CD27 BV786 563327 
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11色T细胞分群
指标 荧光素 产品编号 CD45RO BB515 564529 HLA-DR PE 555812 CD25 PE-CF594 562403 CD3 PerCP-Cy5.5 560835 CCR7 BV421 562555 CD28 BV510 563075 CD8 BV605 564116 CD27 BV786 563327 CD95 BV711 563132 CD4 BUV395 563550 CD45RA BUV737 564442 
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MSC间充质细胞分群
指标 荧光素 产品编号 CD105 PerCP-Cy5.5 560819 CD73 APC 560847 CD90 FITC 555595 CD44 PE 555479 CD45 PE 555483 CD34 PE 555822 CD11B PE 555388 CD19 PE 555413 HLA-DR PE 555812 
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