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胞内染色辅助神器之补偿微球
由于荧光光谱的重叠现象，在进行流式多色分析时，必须设置单染管进行荧光补偿。补偿微球大小和淋巴细胞相当，可连接各种荧光标记的抗体来调节补偿。每滴微球中都含有两群：一群是可以结合抗体的阳性群，一群是不会与抗体反应的阴性群。
优点:
● 使用简单方便，一滴即可
● CV值小，几乎没有背景荧光
● 和实际染色的荧光抗体结合
● 与所有小鼠、大鼠和仓鼠来源的抗体反应，要求抗体来源是kappa
● 适用于各种激发光
● 不需要使用珍贵的样本
补偿微球作用图
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实验步骤
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细胞死活鉴定染料
Dye Unfixed Fixed Detector Laser DAPI √ × BV421 UV/Violet Via-Probe Green √ × FITC Blue PI √ × PE Blue/YG 7-AAD √ × PerCP Blue/YG DRAQ7™ √ × APC Red Via-Probe Red √ × APC Red FVS450 √ √ BV421 Violet FVS510 √ √ BV510 Violet FVS575V √ √ BV605 Violet FVS520 √ √ FITC Blue FVS570 √ √ PE Blue/YG FVS620 √ √ PE-CF594 Blue/YG FVS660 √ √ APC Red FVS700 √ √ AF700 Red FVS780 √ √ APC-H7 Red -
FVS与传统染料PI、7-AAD相比的优势？
① PI、7-AAD的染色通常是放在其他抗体孵育完成后进行，不能洗涤即要上机检测；
② 对于胞内抗体的染色，由于经过了固定步骤，PI或7-AAD染色后所有的细胞都是阳性，所以它们只适合胞膜染色的死活细胞鉴定；
③ PI、7-AAD与常用染色通道PE、 PercP是同一检测通道，二者只能选择其一使用。
④ Fixable Viability Dye的优点是：
---固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色
---FVS系列光谱多样，适合各种染色组合的搭配。FVS系列分别对应不同的激光器，发射波长不同，波谱集中