以下部分内容引用自 BD
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酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸残基的磷酸化对控制蛋白活性有重要作用，这些蛋白活性与生命活动的各种事件密切相关。磷酸激酶和磷酸酶调控许多细胞信号通路的胞内蛋白和膜上受体蛋白的磷酸化，如：凋亡、生长、细胞周期、细胞因子、趋化因子和应激反应通路。深入了解这些信号通路对进一步研究其在许多疾病（如癌症、AIDS 和其他免疫疾病）状态中的作用具有重要的指导意义。
单细胞磷酸化分析工具 —— BD Phosflow™
BD Pharmingen™ 与斯坦福大学合作，推出的 BD Phosflow ™ 技术能够在单细胞水平检测胞内蛋白磷酸化水平，鉴定发生磷酸化的细胞亚群，该技术可以快速、灵敏的对单细胞同时进行多参数分析。
BD Phosflow技术 ：同时分析多种胞内磷酸化蛋白和细胞表面标记分子，进而得到各个群体细胞中信号转导的多种信息。即对单个细胞的胞内信号转导事件进行详尽的研究，一般实验步骤如下 :
实验步骤
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实验步骤
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比如T细胞由大量信号转导分子的复杂信号通路所激活和调节，包括抗原和细胞因子的受体、激酶和转录因子。当外源抗原进入机体时，它们被内源免疫系统识别，引起免疫细胞表面表达共刺激分子并分泌细胞因子。
这些表达的分子通知适应性免疫系统入侵病原菌的类型和强度。然后，内源性 CD4+T细胞分化成Th1、Th2、Th9、Th17、Tfh或 Treg 细胞。
T细胞分化受蛋白磷酸化调节。不同的细胞因子与由内源T细胞表达的同源受体相结合，可以导致激活蛋白 (包括信号转换器和转录 (Stat) 蛋白激活剂) 的磷酸化和二聚化。经过磷酸化和二聚化，激活的 Stat 蛋白进入细胞核内，结合在很多不同基因的启动因子上，导致其他转录因子和特定T细胞亚型的相应细胞因子的表达。
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BD Phosflow T Cell Activation Kit是-个综合的研究系统以利用流式细胞仪有效确定参与T细胞激活的关键磷酸化信号蛋白的水平。即用型试剂盒包括预滴定的荧光标记抗体、优化的缓冲液、实验校准微球、冻干人对照细胞、明确的操作方法和用来存储、分享和分析数据的Cytobank软件。试剂盒提供-个完整的实验方案，能够使实验与实验的差异最小化，帮助有经验和没有经验的流式细胞仪使用者更快得到更可靠、更有可比性的结果。
下方直方图(利用Cytobank软件)显示BD Phosflow T Cell Activation Kit监测CD4*和CD8* T细胞对处理产生的信号应答。刺激因子见上表。
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Western blot、Phosflow 特点比较
对一群类型复杂的细胞，Western Blot 仅能得到平均数值，而且一次只能得到一项参数。WB 无法从复杂的细胞群中识别某一类特别细胞，也无法同时得到该群细胞中不同类型的多个参数，而 Phosflow 可以帮您实现这一梦想。正如下图所示，样本 2 有 5 个细胞含有阳性拷贝数各 10 个，样本 3 只有 1 个细胞含有阳性拷贝 50，如果用WB检测样本 2 和 3 得到的是平均数值，结果不会有差别，但 Phosflow 可以将样本 2 和 3 的差异明显区分出来。
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Western Blot Mouse (~103) 群体分析，得到平均数值 单细胞分析，获得不同细胞数据 样本均质, 限于培养和纯化细胞裂解液 细胞类型复杂,如免疫细胞、胞内分析 半定量 半定量 单参数，一次只限于获取一种数据 多参数,同时获取多个相关指标 需要大量细胞 只需少量细胞 时间 >8小时 3小时 费时,无法高通量操作 快速准确,可96孔板操作 phos Flow常见检测指标
Human (~300) Mouse (~103) PKCa, LCK, Stat1, Stat3, Stat6, MAPK, c-Cbl, MAPK, c-Cbl, Stat1, Stat6, ERK1/2, PLCy1,TIE2, TBK1, Ezrin, ERK1/2, PDPK1, Akt, MEK2, SHP2, BLNK, SLP-76, JNK, Syk, CD247, 4EBP1, MEK2, SHP2, BLNK, ATF-1, SLP- PDGFRβ, Smad2, Akt, BcI-2, ZAP70... 76, ZAP70, Src, FAK, eNOS, Bcl2, Smad2...