视频素材来源于YouTube https://www.youtube.com/watch?v=jNkKBTF890U
版权归原作者所有
该流程按照QIAGEN的QIAamp DNA Mini Kit(货号:51304)来进行,如果使用其他品牌试剂盒,请参考标准说明书进行操作,本试剂盒适用于25mg左右的组织,还适用于血液、白膜层、细胞等。如有微量样本,请选择QIAGEN的56304。
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 7
- 8
- 9
- 10
准备组织样本
切取或从储存容器中取出组织样本,确保组织样本不要超过25mg(如果是脾脏样本,不要超过10mg)1mg组织的DNA含量约为0.2-1.2ug;
破碎组织
切割、研磨或破碎组织,研磨或机械破碎组织会减少裂解时间;
加入buffer
将样本放入1.5mL的离心管,加入180uL的Buffer ATL;
加入proteinase K
加入20µl的proteinase K,涡旋混匀,56°C孵育直至组织被完全裂解。在孵育过程中间歇涡旋,或将离心管置于一个震荡水浴装置以确保样本充分接触buffer。短暂离心,去除挂在管内壁的液滴;
加入Buffer AL
在样品中加入200µl Buffer AL,短暂涡旋15s混匀,70°C下孵育10min,快速离心去除挂壁液滴;
加入乙醇
加入200µL乙醇(96–100%)至样本中,短暂涡旋15s混匀,快速离心去除挂在内壁上的液滴;
转移
将得到的混匀液小心地转移至QIAamp Mini spin column,不要将液体加到管壁上,盖紧盖子,6000xg(8000rpm)离心1min,离心后将QIAamp Mini spin column柱子放在新的2mL收集管上,丢弃使用过的收集管;
加入Buffer AW2
小心打开盖子,加入500µL Buffer AW2,避免碰到管壁,合上盖子全速20,000xg(14,000rpm)离心3min;
加入 Buffer AE或无菌水
将QIAamp Mini spin column柱子放在一个新的1.5mL离心管上,丢弃使用过的收集管小心打开盖子,加入200µl Buffer AE或无菌水,在室温下(15–25°C)孵育1min,然后6000xg(8000rpm)离心1min;
储存方式
即可收集到纯化后的DNA,可立刻进行实验或低温储存。