该流程按照QIAGEN的QIAamp DNA Mini Kit(货号:51304)来进行,如果使用其他品牌试剂盒,请参考标准说明书进行操作,本试剂盒适用于103-5*106个细胞的扩增。
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 7
- 8
加入蛋白酶K
将20μlQIAGEN蛋白酶(或蛋白酶K)移液管放入1.5ml微量离心管底部;微量离心管加样200μl;
加入Buffer AL
加入200µl Buffer AL(用前摇匀,此步还未加入乙醇)。涡旋混匀,56°C下孵育10min;
加入乙醇
加入200µl乙醇(96–100%)涡旋混匀;
离心,丢弃收集管
将柱子放在一个2ml的收集管内,将第3步获得的混合液加到柱子上去。6000xg(8000rpm)下离心1min,丢弃收集管;
离心,丢弃收集管
将柱子放在一个新的2ml的收集管内,加入500µl Buffer AW1,在6000xg(8000rpm)下离心1min,丢弃收集管;
离心,丢弃收集管
将柱子放在一个新的2ml的收集管内,加入500µl Buffer AW2,在20,000xg(14,000rpm)下离心3min,将柱膜干燥,丢弃收集管;
洗脱DNA
将柱子放在1个新的1.5ml或者2ml离心管中,吸取200µl Buffer AE,直接加在膜中央,室温孵育1min后,6000xg(8000rpm)离心1min洗脱DNA;
得到纯化后的DNA
为达到更高产量,可重复步骤7。得到纯化后的DNA。