全血样本的处理方式多种,本流程适用于抗凝血,可按照细胞的操作流程操作。
本流程以Absin全血基因组DNA快速提取试剂盒(货号:abs60013)流程为例:
实验步骤
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处理血液样本
处理血液材料,在样品中加入1-3倍体积的裂解液RBC,颠倒混匀,室温放置10min,1,2000rpm离心20sec,吸去上清,留下细胞核沉淀,向离心收集到的细胞核沉淀中加200μl缓冲液BB,振荡至彻底混匀;
加入蛋白酶K和结合液CB
加入20μl蛋白酶K(20mg/ml)溶液,充分混匀,再加入200μl结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,在70℃放置10min,直到溶液变清亮;
加入无水乙醇
冷却后加入200μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀;
离心,倒废液
将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm离心30-60sec,倒掉收集管中的废液;
加入抑制物去除液IR
加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm离心30sec,弃废液;
加入漂洗液WB
加入500μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心30sec,弃掉废液;
重复操作步骤 6
重复操作步骤6;
吸附柱放回收集管
将吸附柱AC放回空收集管中,12,000rpm离心2min,将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液;
得到纯化后的DNA
取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加60-100μl洗脱缓冲液EB,室温放置2min,12,000rpm离心2min。得到纯化后的DNA。