(可选项，提取模板为RNA样本时需逆转)如下操作步骤由产品货号为：abs601510逆转录试剂盒为例：
实验步骤
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- 2
- 3
- 4
- 5
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去除RNA中基因组DNA残留
组分
体积
RNA模板*
≤ 1 ug total RNA 或≤ 0.1 ug poly(A) mRNA
5×gDNA remover buffer
2 ul
gDNA remover
1 ul
Nuclease-free Water
(DEPC-treated)
补足至10 ul
混匀，并短暂离心，反应条件为37℃，5min；
* 采用自备的序列特异性引物时，RNA模板的量可调整为“≤ 5 ug total RNA或≤ 0.5 ug poly(A) mRNA”
-
cDNA合成
在上述的反应管中，直接添加如下的反转录反应所需组分，进行第一链cDNA的合成步骤：
组分
体积
gDNA remover 处理后RNA 样品
10 ul
5 x Buffer (with primer)
4 ul
Enzyme mix
1 ul
Nuclease-free Water (DEPC-treated)
补足至20 ul
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离心、孵育
轻轻混匀，短暂离心；42℃孵育15-50min；
注意：复杂模板逆转录温度可升高至50℃，提高反转录效率。反应时间可根据实验应用场景做适当调整。如合成的cDNA用作qPCR模板，则反应条件为42℃孵育15min。
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加热失活
85℃加热5min失活Enzyme mix；
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保存cDNA
反应结束后所得的cDNA，请置于冰上进行后续实验或冷冻保存。