实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
-
送质粒测序
送质粒或者菌液送测序公司去一代测序，建议送质粒测序；
-
文件
测序结果有AB1文件(峰图文件)和seq文件，AB1文件可以用软件Chromas或Snapgene(SC-1-1)或CLC Main Workbench, Network Plus(832041)打开；seq文件用记事本、Word、写字板、Snapgene等都可以打开；
-
测序软件
可以用Snapgene(SC-1-1)或CLC Main Workbench, Network Plus(832041)软件进行目的基因和测序数据比对分析，看重组质粒插入片段是否正确；
-
数据读取
一代测序精准读取在800bp左右，长的可以达到1000bp，短的也可能是因为存在二级结构，二级结构会存在测不通或者测序很短的情况出现，根据具体的情况设计测序的引物；
-
注意事项
测序开始的几十个碱基是不稳定的，从峰图可以看出是杂乱无章的，删掉，结束的几十个碱基也是不稳定的，删掉即可，我们看的仅仅是正确的那一段测序的数据，所以在设计引物的时候需要注意重叠一下，便于将所有序列测通。
△点击放大图片
此内容可点击查看，学术中心的《高通量测序技术》