实验步骤
- 1
- 2
- 3
突变概念
对于突变,原核细胞和真核细胞经常受到外在因素和内在因素发生DNA损伤,如果这种损伤不能被修复就会导致突变。而根据中心法则,DNA会转录成RNA并翻译成蛋白质。
DNA的突变会导致蛋白质的变化。但是并不是所有的突变都对蛋白质的生物功能产生影响。一旦生物体中出现基因突变,我们需要了解该突变的功能特性,探究是否会对某一种特定蛋白质或某一非编码RNA的功能产生影响。
因此我们可以对DNA进行人为的突变实验,去研究蛋白质的功能或者对蛋白质去进行改变及定向进化。突变实验是分子克隆实验中的重要组成部分,这类实验方法是目前分子生物学研究中不可或缺的一部分。
我们可以根据突变是否随机,将其分钟两大类:点突变和随机突变。 在点突变中又可根据突变的数量分成单点突变(突变数量为1)和多点突变(突变数量大于1,一般商业试剂盒最多可做到数量5)。
突变实验原理
△点击放大图片
突变应用
1、研究蛋白质相互作用
受体或配体结合结构域的界定
蛋白质相互作用结构域的鉴定
2、研究蛋白质结构、功能
通过改变密码子偏性以提高表达水平
改变蛋白质活性
改变蛋白抗原性、稳定性和溶解性
改变酶的特异性,或许以及动力学特性
结构与功能
增加标签
3、DNA元件研究
启动子或增强子的功能研究
用于载体创建