实验步骤
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- 2
- 3
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- 5
- 6
- 7
- 8
- 9
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待细胞生长至合适密度，收集细胞
待细胞生长至合适密度，收集细胞
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弃培养基，加胰酶消化，PBS重悬细胞，收集离心
弃培养基，加胰酶消化，PBS重悬细胞，收集离心
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离心10min（500g，4℃）
离心10min（500g，4℃）
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弃去上清，加入适量裂解液
（10 7 细胞对应200-300ul裂解液）
弃去上清，加入适量裂解液
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放置于4℃冰箱（20min）
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离心10min（13000rpm，4℃）
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取上清，建议进行两次离心和取上清
取上清，建议进行两次离心和取上清
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测定BCA总蛋白浓度，分装后-80℃保存
测定BCA总蛋白浓度，分装后-80℃保存
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注意事项
A.裂解液中不能含有SDS等离子去垢剂成分，需要加入酶抑制剂，防止降解；
B.最终裂解液的总蛋白浓度尽量达到20μg/μL，以便后续稀释。