实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 7
适量裂解液加入组织中(20mg对应200-300ul裂解液)
△点击放大图片
组织破碎器处理组织至匀浆(冰上处理)
△点击放大图片
放置于4℃冰箱(20min)
△点击放大图片
离心10min(13000rpm,4℃)
△点击放大图片
取上清,建议进行两次离心和取上清
△点击放大图片
测定BCA总蛋白浓度,分装后-80℃保存
△点击放大图片
注意事项
A.裂解液中不能含有SDS等离子去垢剂成分,需要加入酶抑制剂,防止降解;
B.最终裂解液的总蛋白浓度尽量达到20μg/μL,以便后续稀释。