Q&A
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血清血浆是立即离心?还是静置?
建议两者都在2-4小时内离心,取上清,放入-80℃保存。
1、血清:取血后避免晃动,4℃静置,自然凝血后离心取上清。
2、血浆:取血后放入抗凝管,轻轻摇匀,静置后离心取上清。为什么进行两次离心?
1、目的是更彻底的除去杂质和细胞碎片。
2、针对于血清、血浆等有细胞的样本,第一次低转速离心,第二次提高转速,有效去除细胞和杂质。细胞因子一般检测分泌型的,为什么需要检测细胞裂解液或者组织裂解液?
检测需求不同。分泌型细胞因子,如免疫细胞相关的细胞因子,检测上清即可。细胞内或组织内的因子情况,则需检测细胞或组织裂解液。
细胞、组织裂解液要求
1.不含SDS和NP40;
2.需另外加酶抑制剂;
3.建议配方如下:1*Lysis buffer(pH=7.5) NaCl 150mM Tris,pH=7.5 20mM EDTA 1mM EGTA 1mM Triton-X-100 1% 体液相关的样本,即血浆血清尿液等,是否需检测BCA?
不需要。这类样本本身蛋白含量较高,无需像组织裂解液或细胞裂解液的检测需要浓度调平。
注意事项
1、检测代谢标志物时,需根据试剂盒说明书添加酶抑制剂,之后-80℃保存。
2、所有样本,在实验前,需3000g/10min/4℃离心操作。
3、高脂样品在离心后,吸取脂肪层下的样本进行保存和实验。