流程简介
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样本保存
样本核酸的质量是生物信息学研究的第一步,也是整个流程的基础,直接关系到后续测序分析的成败,不容小觑。
样本制备
对于不同类型的生物样本,其DNA提取方法略有不同,尤其是对于环境样本,需要更多预处理来去除杂质,可参考本解决方案的操作步骤。
NGS建库
其本质就是在待测片段两端加上接头的过程。
这里以Illumina的 PE文库为例,建库流程如下
1. DNA片段化 (Fragment DNA)
2. 末端修复(End Repair)
3. 3' 末端加“A” (A-tailing)
4. 接头连接( ligation adaptor)
5. PCR富集目的片段
6. 扩增文库大小质检
7. 文库浓度定量
上机测序
通过对文库中数以万计的克隆进行延伸反应,检测对应的信号,最终获取序列信息
数据分析
将所得上机所得数据进行分析,加以运用