4.1 样本保存

· RNAprotect Tissue Reagent 在低于室温 (15–25°C) 储存期间可能会形成沉淀。使用试剂前，通过搅拌加热至 37°C 以重新溶解沉淀物。

· RNAprotect 组织管仅供一次性使用。不要重复使用。

· 只有新鲜的、未冷冻的组织才能使用 RNAprotect Tissue Reagent 进行稳定化。以前冷冻的组织在试剂中解冻太慢，导致试剂无法足够快地扩散到组织中以防止 RNA 降解。

在切除组织样本之前，估计要在 RNAprotect Tissue Reagent 中稳定的样本的体积（或重量）。

至少需要 10 倍体积的试剂（或每 1 mg 组织大约 10 µl 试剂）。将正确数量的试剂吸取到适当的收集容器中，或选择适当大小的 RNAprotect 组织管。
注意：确保将组织完全浸没在 RNAprotect Tissue Reagent 中。

从动物身上切下组织样本，如有必要，将其切成小于0.5 厘米厚的切片。尽快执行此步骤并立即执行步骤 5。
注意：为了有效地稳定 RNA，组织样本的厚度必须小于 0.5 cm。

将第3步中含有 RNAprotect 组织试剂的收集容器中的组织片完全浸没。
注意：组织样本必须立即浸没在 RNAprotect Tissue Reagent 中以保护 RNA。

浸没在 RNAprotect Tissue Reagent 中的组织在 2–8°C 下最多存放 4 周，在 15–25°C 下最多存放 7 天，或在 37°C 下最多存放 1 天。

对于在 -30 至 -15°C 的条件下存储时，首先将组织在 2-8°C 的试剂中孵育过夜。然后将试剂中的组织转移至 -30 至 -15°C 进行储存。

对于在 -90 至 -65°C 的条件下存储时，首先将组织在 2-8°C 的试剂中孵育过夜。然后从试剂中取出组织，将其转移至 -90 至 -65°C 保存。
注意：建议使用较低的温度以延长存储时间（例如，2–8°C 可长达 4 周，而37°C 或室温达不到这个储存时间；-30 至 -15°C 或 -90 至 -65°C 都可延长存储时间）。

在 -30 至 -15°C 下储存在 RNAprotect Tissue Reagent 中的组织可能不会冻结。低温可能导致试剂中形成晶体或沉淀物。这不会影响后续的 RNA 纯化。无需重新溶解沉淀。储存在 -30 至 -15°C 或 -90 至 -65°C 的 RNAprotect 稳定组织可以在室温下解冻，然后再次冷冻最多 20 个冻融循环，而不会影响 RNA 质量或产量。

如果在 RNAprotect Tissue Reagent 中运输组织样本，请确保组织始终浸没在试剂中。在运输过程中保持试管直立或用 RNAprotect 组织试剂完全填充试管。

在 RNA 纯化过程中进行破坏和均质化之前，请务必从 RNAprotect Tissue Reagent 中取出组织。如果组织在 -30 至 -15°C 下储存，请去除可能已形成的任何晶体。