如下操作步骤以产品货号333180的步骤为例，产品列表详见右下方推荐产品
实验步骤
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开始前的要点
使用此方案需要 QIAseq Stranded mRNA Select Kit（货号 180773 或 180775），可在QIAGEN官网下载查看。
重要提示：去除珠蛋白时，需要执行 2 个额外的 CleanStart Library Amplification 循环。
请参阅 QIAseq Stranded mRNA Library Kit 手册，网址为www.qiagen.com/HB-2464 -
mRNA 富集
从 QIAseq Stranded mRNA Library Kit Handbook 中，使用推荐的总 RNA 输入量（100 ng - 1 µg）执行“协议：mRNA 富集”。最终在 27 µl 中洗脱富集的 mRNA。
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准备 RNA 片段化和 QIAseq FastSelect -Globin 去除所需的试剂
2a.在室温下解冻来自 QIAseq Stranded 试剂盒的 5x RT 缓冲液、无核酸酶水和来自 QIAseq FastSelect 试剂盒的 QIAseq FastSelect −Globin 管。
2b.通过涡旋混合，然后短暂离心。 -
短暂离心
在冰上，根据表 5。短暂离心，上下吹打混合 10 次，然后再次短暂离心。
注意：如果设置多个反应，请准备比反应总数所需量大 10% 的 Master Mix。表 5. 片段化/RNA 去除反应的设置
零件 体积/反应 mRNA 富集反应（已在试管中） 27µl RT 缓冲液，5x* 8 µl QIAseq FastSelect −珠蛋白 1 µl ERCC控制† 可选 无核酸酶水 1 µl 总容积 37µl *来自 QIAseq Stranded Total RNA Lib Kit。
ERCC Control RNA 可根据制造商指定的浓度添加。如果添加，用 ERCC 替换无核酸酶水 (1 µl)。 -
如中所述孵育表 6，根据您输入的 RNA 质量和所需的插入片段大小
表 6. 组合的 QIAseq 链式碎片和 FastSelect 杂交协议
输入 RNA 质量 步 插入大小 ~150−250 bp 插入大小 ~350 bp 高品质 (RIN >9) 1* 95°C 15 分钟 95°C 下 3 分钟 中等质量（RIN 5-6） 1* 95°C 10 分钟 95°C 下 3 分钟 FFPE 或降解样品 (RIN <3) 1* 无碎片† 无碎片† 无论输入 RNA 质量如何，都会执行步骤 2-9。无论 RNA 是高质量、中等质量、FFPE 还是降解，都需要执行它们。 2 75°C 下 2 分钟 75°C 下 2 分钟 3 70°C 下 2 分钟 70°C 下 2 分钟 4 65°C 下 2 分钟 65°C 下 2 分钟 5 60°C 下 2 分钟 60°C 下 2 分钟 6 55°C 下 2 分钟 55°C 下 2 分钟 7 37°C 下 2 分钟 37°C 下 2 分钟 8 2 分钟，25°C 2 分钟，25°C 9 保持在 4°C 保持在 4°C *根据输入的 RNA 质量和所需的插入大小，为第 1 步选择一个选项。
也适用于大小在 80-500 bp 之间的外泌体 RNA 或其他来源的 RNA。
重要提示：无论步骤 1 中选择的时间和温度如何，都必须执行步骤 2-9。 -
请参阅 QIAseq Stranded mRNA Library Kit 手册并立即进入“协议：第一链合成”
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按照 QIAseq Stranded mRNA Library Kit 手册执行所有剩余的文库构建步骤
重要
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去除珠蛋白时，需要执行 2 个额外的 CleanStart 文库扩增循环。