视频素材来源于YouTube https://www.youtube.com/watch?v=VT_nNVO95eI
版权归原作者所有
miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，由于不含有polyA尾，所以逆转录时通常选择加A修饰后，按照mRNA的逆转录流程操作。
本流程以Absin的miRNA加尾法逆转录试剂(货号：abs60265)为例：
实验步骤
- 1
- 2
- 3
-
RNA加A尾
取RNase-free离心管，配制如下混合液：RNase free ddH2O to 20μl、Poly A 1μl、2xPoly A Buffer 10μl、RNA 10pg~2ug轻轻混匀，37℃ 30min，迅速置于冰上；
-
RT反应液配制
上述反应液在使用前5000rpm离心5s：取上述反应液8μl、2x RT Buffer 10μl、RTase Mix 2μl用移液器轻轻吹打混匀；
-
RT反应
25℃ 5min 50℃ 15min 85℃ 5min 反应完毕后，5000rpm离心5s，尽快放于冰上，直接进行PCR反应。如暂时不用，请放置于-20°C以下温度，在半年内使用完毕，不要反复冻融。模板如具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至55℃。