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5.1 常规PCR

| 5.2 长片段PCR

视频素材来源于YouTube  https://www.youtube.com/watch?v=a5jmdh9AnS4
版权归原作者所有

 

常规PCRDNAcDNA为模板,可用于进行基因分型、病原体鉴定等多种实验。


该流程以Absin 2×Taq PCR Mix为例(货号:abs60036),本试剂盒中带有红色染料,可用于直接跑胶鉴定,若使用其他试剂盒,需仔细察看说明书,若无染色染料,需在跑胶时加入loading buffer。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 1

    按照下表配制 PCR 反应体系

    组分 体积
    DNA模板 1ul
    正向引物(10um) 0.4ul
    反向引物(10um) 0.4ul
    2×Taq PCR Mix 10ul
    ddH2O 补足至20ul
  • 2

    PCR 反应循环的设置

    流程 温度 时间
    预变性 94℃ 2min
    变性 94℃ 30s 25-32循环
    退火 55-65℃ 30s
    延伸 72℃ 60s/kb
    终延伸 72℃ 5—10min

    ※模板量:10-1000ng基因组DNA1-30ng质粒,或1-2μl RT-PCR反应后的cDNA

    注:以上举例为常规PCR反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。

  • 3

    结果检测

    2μl反应液电泳观察结果。含染料产品可直接上样电泳,无染料产品需添加上样缓冲液后进行电泳。

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