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常规PCR以DNA或cDNA为模板,可用于进行基因分型、病原体鉴定等多种实验。
该流程以Absin 2×Taq PCR Mix为例(货号:abs60036),本试剂盒中带有红色染料,可用于直接跑胶鉴定,若使用其他试剂盒,需仔细察看说明书,若无染色染料,需在跑胶时加入loading buffer。
实验步骤
- 1
- 2
- 3
按照下表配制 PCR 反应体系
组分 体积 DNA模板 1ul 正向引物(10um) 0.4ul 反向引物(10um) 0.4ul 2×Taq PCR Mix 10ul ddH2O 补足至20ul PCR 反应循环的设置
流程 温度 时间 预变性 94℃ 2min 变性 94℃ 30s 25-32循环 退火 55-65℃ 30s 延伸 72℃ 60s/kb 终延伸 72℃ 5—10min ※模板量:10-1000ng基因组DNA,1-30ng质粒,或1-2μl RT-PCR反应后的cDNA。
注:以上举例为常规PCR反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。
结果检测
取2μl反应液电泳观察结果。含染料产品可直接上样电泳,无染料产品需添加上样缓冲液后进行电泳。