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直扩即直接用未纯化的样本进行PCR扩增。该过程无需核酸纯化步骤，只需微量的原始样本作为PCR反应的模板，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，极大缩短了实验耗时，操作简单快速。适用于小鼠基因分型小鼠转基因检测小鼠基因敲除分析。为DNA扩增带来前所未有的便捷，节约了大量时间和成本。
本流程以小鼠样本直扩，货号：24601为例对小鼠组织(如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等)样本进行PCR扩增。
实验步骤
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- 3
- 4
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DNA提取
(推荐使用组织量)：1~3mm小鼠尾尖；2~5mm2小鼠耳朵；1~2个小鼠脚趾。将样品和新鲜配制的1×裂解液置于55℃水浴中孵育30min。为保证DNA充分释放，请务必将组织全部浸没至裂解液中；
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小鼠组织裂解产物预处理
孵育结束后，将样品置于95℃或沸水浴中加热5min灭活Proteinase K(裂解液中)。然后将样品13,400×g(12,000rpm)离心5min，可以立即取上清进行PCR反应；或将上清转移至另一个灭菌EP管中，-20℃存放至少三个月；
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PCR 扩增体系配制
组分
体积
2× Mouse Direct PCR Mix (with Dye)
25μl
Primer F (10 μM)
2μl
Primer R (10 μM)
2μl
裂解产物
2-5μl
ddH2O
Up to 50uL
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PCR 反应程序设定
流程
温度
时间
预变性
95℃
5min
循环反应
95℃
15s
35循环
55-72℃
15s
72℃
30 s/kb
终延伸
72℃
5min
除此之外，还包含植物、全血、酵母等样本。