琼脂糖凝胶是根据质量体积比来制备的。所以1克琼脂糖和100毫升电泳缓冲液可以制备1%的琼脂糖凝胶。低浓度的琼脂糖凝胶分离较大的片段效果较好,而高浓度的凝胶则更容易区分较小的片段。
实验步骤
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称量配置琼脂糖
称出所需的琼脂糖,放入含有一定量电泳缓冲液的锥形瓶中,如0.8%凝胶,称取0.8g的琼脂糖放入含100ml TBE缓冲区(1x)的200ml瓶中。大瓶能够确保琼脂糖煮沸时不溅出。琼脂糖在沸水浴或者微波炉中溶解;
加入染料
在溶液中加入10µL GoldView,轻轻摇晃避免气泡产生;
制胶
冷却至60℃(2%或以上的凝胶冷却到70℃)并立即倒入制胶板内。凝胶最多提前半小时制备。确保凝胶中电泳缓冲与电泳槽中的缓冲液相同。