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4.4 基于Biacore的蛋白-蛋白互作—FAQ

| 5.1 邻近连接技术 (PLA)

FAQ

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    如何判断可以使用几个通道?

    由机型通道和实验目的决定;Biacore T100/T200/S200/3000:4通道,最多偶联3种不同样品;Biacore X100/X100 Plus:2通道,最多偶联1种样品;Biacore 8K 16通道,最多偶联8种不同样品;

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    对配体蛋白的要求?

    纯度大于80%
    使用新鲜的,具有活性的样品;偶联后,需保持蛋白活性
    如果是商业化蛋白粉末,用水稀释到1mg/ml,分装在-20℃保存
    确保溶解液不含有Tris等含有伯胺基的成分(可以用脱盐或者透析去除Tris),尤其注意商品化配体蛋白的缓冲液
    尽量准备100ug左右备用

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    对分析物的要求?

    样品成分均一,不能有多聚物,异构体
    样品中不能含有高折光率物质:如甘油,蔗糖,咪唑等
    分析物的纯度要求:
    动力学/亲和力测定:纯度>90%
    特异性/浓度测定:细胞裂解液、血清等混合样品
    分析物需要新鲜,有活性
    使用运行缓冲液稀释
    母液浓度为1mM,样品体积在200μL以上

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