该流程按照Navinci的NaveniFlex Cell MR试剂盒（货号：NC.MR.100.Red和NC.MR.100.Atto）来进行，如果用的是其他品牌的试剂盒，可以参考其说明书进行操作。NaveniFlexTM Cell 基于 Naveni® PLA技术，专为原位细胞样本开发，还可数字量化，能提供易于比较的数据。可与您选择的一抗（M：小鼠和R：兔抗体）一起使用。
效果图
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图注：使用 NaveniFlex Cell MR 检测 MCF7细胞中蛋白质之间的相互作用。
a) 用 Red 进行检测，显示 Histone / Lamin的相互作用；b) 显示技术对照；
c) 用 Atto647 检测显示 E-Cadherin / B-catenin 相互作用；d) 显示其技术对照。
实验步骤
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试剂盒组成
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使用说明
1.预处理（不提供试剂）
1.1. 按照为本试验所用一抗优化的免疫荧光方案固定和渗透细胞。
1.2. 在适用的情况下，在样品周围使用疏水性隔离笔，以防止样品溢出和干燥。
1.3. 准备两瓶 1X TBS-T*；将一瓶预热至 37°C，同时准备好所需数量的染色瓶（Navinci抗体孵育后需要温水洗）。
*TBS-T（Tris-buffered saline supplemented with 0.05% Tween 20）。2.封闭样本
2.1 在整个样品区加入试块。
2.2 在 37 °C 的预热湿度室中培养 60 分钟。3.一抗孵育
3.1. 使用提供的稀释液 1 将一抗稀释至工作浓度。从抗体供应商为 ICC 优化/推荐的浓度开始。
3.2. 倾倒样品块，加入足够体积的步骤 3.1 中的抗体工作液以覆盖样品区域。
3.3. 在湿度室中 37 °C 孵育 60 分钟，或 4 °C 过夜。
3.4. 倒出抗体溶液，在染色瓶中轻轻搅拌下用 1X TBS-T 冲洗玻片 2 次，每次 10 秒，每次 15 分钟。单独清洗对照组。4.Navinci抗体（二抗）孵育
4.1. 用稀释剂 2 以 1:40 稀释Navinci抗体 M1 和Navinci抗体 R2。
4.2. 加入足量步骤 4.1 中的 Navenibody 工作溶液，以覆盖样品区域。
4.3. 在预热的湿度室中于 37 °C 下孵育 60 分钟。
4.4. 倾去Navinci抗体溶液，用步骤 1.3 中预热的 1X TBS-T 冲洗玻片。在预热好的染色罐中轻柔搅拌，洗涤 2x 10 秒和 1x 15 分钟。5.反应1
5.1. 用 1:5 的水稀释缓冲液 1，开始制备反应 1。涡旋并向下旋转。
5.2. 加入酶 1，使其稀释至 1:40。用移液器轻轻混合并旋平，见下表 1 中的计算示例。
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5.3. 加入足够体积的反应 1 以覆盖样品区域。
5.4. 在 37 °C 的预热湿度室中孵育 30 分钟。
5.5. 倾出溶液，用 1 X TBS-T 冲洗一次，然后在染色瓶中轻轻搅拌下用 1 X TBS-T 冲洗 1x 5 分钟。6. 反应 2：避光！
6.1. 用 1:5 的水稀释缓冲液 2，开始制备反应 2。涡旋并向下旋转。
6.2. 加入酶 2，使其稀释至 1:40。用移液器轻轻混合，然后旋下。
6.3. 加入足够体积的反应 2 以覆盖样品区域。
6.4. 在预热的湿度室中于 37 °C 下孵育 90 分钟。
6.5. 倾出溶液，在染色瓶中用 1X TBS 在轻微搅拌下清洗玻片 2 分钟。7. 核染色和装片（不提供试剂；避光！）
7.1. 清除玻片上多余的洗涤缓冲液。
7.2. 加入 DAPI 或您选择的具有类似发射光谱的核染色剂；按照供应商的建议稀释并孵育。
7.3. 倾出溶液，在轻轻搅拌下，用染色瓶中的 1X TBS 冲洗玻片 2x 10 分钟。
7.4. 在轻轻搅拌下，在染色瓶中用 0.1X TBS 进行最后 15 分钟的清洗。在玻片离心机中或风干玻片，然后使用防褪色装片介质用盖玻片装片。8. 成像
8.1. 使用 20 倍或更高倍的荧光显微镜或共聚焦显微镜对载玻片成像。
8.2. 成像时需要使用与 DAPI、Cy3.5 和 Cy5 相对应的滤光片组。见下表 2。
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1（可选）如果需要共同染色，可将荧光标记的一抗在 1 号稀释液中稀释，并在此步骤后加入。按照生产商的建议进行稀释和孵育。