该流程按照Navinci的Naveni Triflex Cell MR试剂盒（货号：TF.MR.100）来进行，如果用的是其他品牌的试剂盒，可以参考其说明书进行操作。 Naveni® TriFlex Cell MR 是一种原位试剂盒，可与您选择的一抗（小鼠和兔抗体）一起使用。该试剂盒可对蛋白质之间的相互作用进行荧光染色，同时观察两种蛋白质的游离状态。它基于Navinci专有的 Naveni® Proximity 技术。TriFlex产品使高精度测量蛋白质共定位成为可能，不受显微镜分辨率的影响。
1）原理图
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Naveni® TriFlex Cell 依靠用户确定的两种针对相关目标的一抗，以及专有的 TriFlex Navenibodies（橙色），这是一种基于抗体的接近试剂。只有距离小于 40 纳米的蛋白质才会被记录为相互作用。Naveni® TriFlex 可检测总蛋白 A（即游离和与 B 复合物，黄色）、总蛋白 B（栗色）和 AB 相互作用（蓝色）。检测到的 A、B 和 AB 信号会被放大，并在对应于每个蛋白质池的三个通道中产生荧光读数。
2）效果图
使用 Naveni® TriFlex Cell 同时检测游离和相互作用的层粘连蛋白 B1 和组蛋白 H3
Birth： 在有丝分裂细胞中，由于核包膜破裂，层粘连蛋白 B 信号（黄色）呈弥散状，而组蛋白 H3（品红色）则保留在分裂板周围。维生素 B/组蛋白 H3 复合物（青色）已解体。
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Life：在非分裂细胞中，游离的 Lamin B 定位于核膜中，在核质中可观察到多个 Lamin/Histone H3 与染色质结合的组蛋白 H3 相互作用。
Death：在癌变的最初阶段，死亡细胞的细胞核膨胀，核质中含有密度较低的复合物以及未结合的 Lamin B 和组蛋白 H3。
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实验步骤
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试剂盒组成
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操作步骤
1.封闭样本
1.1 将 Block TF (1x) 加入整个样品区域（约 40 µl/cm2）。
1.2 在 +37 °C 的预热湿度室中孵育 60 分钟。2.一抗孵育
2.1 使用提供的稀释液 1 TF (1x) 稀释一抗。
2.2 倒出阻断缓冲液，加入足够的步骤 2.1 中的抗体工作液以覆盖样品区域。
2.3 在 +37 °C 下孵育 60 分钟，或在 +4 °C 下在湿度室中孵育过夜。
2.4 倒出抗体溶液，交换清洗两次，在轻轻搅拌下用 1x TBS-T** 在染色瓶中清洗玻片 15 分钟。分别清洗对照组。
**TBS-T（Tris-buffered saline supplemented with 0.05% Tween 20）3.Navinci抗体（二抗）孵育
3.1 用稀释液 2 TF（1x）按 1:40 稀释Navinci抗体 M TF 和Navinci抗体 R TF。
3.2 加入足够的步骤 3.1 中的 Navenibody 工作液，以覆盖样品区域。
3.3 在预热的湿度室中于 +37 °C 下孵育 60 分钟。
3.4 倒出溶液，交换清洗两次，在轻轻搅拌下用 1x TBS-T 在染色瓶中清洗玻片 15 分钟。4. 反应 1
4.1 用 1:5 的水稀释缓冲液 1 TF (5x)，开始配制反应 1。涡旋并向下旋转。
4.2 加入酶 1 TF（1:40 稀释）。用移液器轻轻混合并旋平。
4.3 加入足够的反应 1 以覆盖样品区域。
4.4 在 37 °C 的预热湿度室中孵育 30 分钟。
4.5 倒出溶液，交换清洗一次，然后在染色瓶中轻轻搅拌下用 1x TBS-T 冲洗玻片 5 分钟。5. 反应 2：避光！
5.1 用 1:5 的水稀释缓冲液 2 TF (5x)，开始制备反应 2。涡旋并离心。
5.2 加入酶 2 TF（1:40 稀释）。用移液器轻轻混合，然后旋下。
5.3 加入足够的反应 2 以覆盖样品区域。
5.4 在预热的湿度室中于 +37 °C 下孵育 60 分钟。
5.5 倒出溶液，在染色瓶中轻轻搅拌下用 1x TBS 冲洗玻片 2 分钟。6. 装片（未提供）：避光！
6.1 倒掉载玻片上多余的洗涤缓冲液。
6.2 加入 DAPI 或您选择的具有相似发射光谱的核染色剂，混合在 PBS 中。室温下在湿度室中孵育 5 分钟。
6.3 倒出溶液，在轻轻搅拌下用 1x TBS 冲洗玻片 2x10 分钟。
6.4 在轻微搅拌下用 0.1x TBS 进行最后 15 分钟的清洗。在玻片离心机中烘干玻片，并使用防褪色安装介质将玻片安装在盖玻片上。7. 成像
7.1 使用 20 倍或更高倍的物镜在荧光显微镜或共聚焦显微镜下对玻片成像。
7.2 在成像时，需要使用与 DAPI、FITC、Cy3 和 Cy5 相对应的滤光片组。
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