视频素材来源于YouTube https://www.youtube.com/watch?v=qmACKSvFZpM
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得到RNA之后,以RNA为模板反转为cDNA。然后再以反转录得到的CDNA为模板,加入之前设计好的引物,进行PCR扩增。
反转录和PCR扩增可以选择两步法进行操作,也可以选择一步法进行操作。
通常使用试剂盒和PCR仪器进行操作,这里参照了爱必信的RT-PCR Kit产品说明书进行一步法操作介绍。
产品组分:
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实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
试剂准备
将 RNA 模板、引物、2×One-Step RT-PCR SuperMix,RT Enzyme Mix 和RNase Free Water 溶解并置于冰上备用。
配置反应体系
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轻轻混匀后短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
放入PCR仪中,设置反应程序
常用反应程序:
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检测纯度和浓度
反应完成后,测定纯度和浓度。吸光度A260/280比值接近1.8表明纯度较高。