视频素材来源于JOVE https://www.jove.com/cn/v/5063/gel-purification?language=Chinese
版权归原作者所有
目的基因扩增之后，目的基因存在的缓冲体系会影响到之后酶切效果，所以通常先进行目的基因的纯化，也叫作切胶回收。
先进行跑胶，然后进行切胶回收。切胶回收通常也使用试剂盒进行操作，这里参照爱必信的DNA Gel/PCR Purification Kit产品说明书进行介绍。
产品组分：
△点击放大图片
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
- 5
- 6
- 7
- 8
- 9
-
配置琼脂糖凝胶
取50xTAE缓冲液20ml加水至1000ml，配制成1xTAE电泳缓冲液，备用。
称取0.5g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中，加入50ml 1xTAE电泳缓冲液，在微波炉里加热至琼脂糖全部融化，取出摇匀。加热过程中要不时摇动，使琼脂糖在溶液中分散均匀。
在制胶槽中插好梳子，向冷却的琼脂糖中加入GelRED染色剂，缓慢倒入制胶槽中。把制胶槽放入电泳仪中，在电泳仪中倒入TAE电泳缓冲液。 -
倒入电泳液，上样
将50ul PCR产物中加入10ul 6x loading buffer并混匀，用移液器小心加入到加样孔中。在旁边的孔中加入核酸Marker。
-
跑胶并观察
加样完成后，盖上电泳仪盖子，启动电源。电压通常设置为100V，当溴酚蓝指示跑到适合位置时，关闭电源停止电泳。
-
切胶
将凝胶转移至核酸检测仪中，在紫外灯下快速准确的切下含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶块，放进1.5ml离心管中。
-
DNA吸附柱平衡
DNA吸附柱平衡处理：向Gel Recovery Column中加入 200μl buffer CBS，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将Gel Recovery Column重新放回到收集管中。再向Gel Recovery Column中加入200μl的ddH2O，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。将Gel Recovery Column重新放回到收集管中。
-
凝胶称重，溶解
从琼脂糖凝胶中切下含有目的片段的凝胶，估计重量或精确称量重量。每100mg 1%琼脂糖凝胶加入100μl Binding Solution。
于50-60℃水浴5-10min，期间每2-3min间断轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。
-
加试剂，离心
将吸附柱重新放回收集管中，加入500μl WA Solution，于12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
重复上个步骤一次。
将吸附柱重新放回收集管中，12000rpm离心1min，打开吸附柱盖子，室温放置5-10min或50℃放置3-5min，以彻底去除Wash Solution。 -
加Elution Buffer
将吸附柱放入干净的1.5ml收集管中（试剂盒自带），对于膜中央悬空加入30-50μl Elution Buffer，盖好盖子，37℃放置2min，12000rpm离心1min，离心管中的液体即为包含目的基因的溶液。
-
检测纯度及浓度
吸光度A260/280比值接近1.8表明纯度较高。